Re: [求救] 萃取protein的問題
※ 引述《ricky31 (榤)》之銘言：
: 之前萃取蛋白是加入PBS刮下來的
: 可是老師覺得
: 用trypsin打下來會比較好
: 測出來的濃度
: 的確
: 比用加入PBS刮下來的濃度高太多
: 但是
: trypsin本身就是一種蛋白
: 這樣子的作法
: 不會影響細胞蛋白嗎?
: 老師覺得不會
: 但是
: 因為跟先前用PBS刮下來測出的濃度差太多了
: (用PBS的作法,濃度大約在200~300ug/ml，用trypsin的作法,濃度在800~1400ug/ml)
: 所以我還是很懷疑用trypsin萃蛋白的作法>"<
: 有人可以幫我解答嗎?
: 謝謝大家~
使用trypsin可用來增加收取的細胞數，而不是用來萃取蛋白。
將細胞收下來之後，可低速離心去除含有trypsin的上清液，
再加入RIPA buffer將細胞lysis，高速離心取得含有蛋白的上清液去測定濃度。
(其實，我也不甚了解您的實驗，所以不確定上述方法是否適合您使用)
一般常用RIPA buffer來lysis cell進而萃取蛋白。
不曉得您為什麼會使用PBS來萃取?
您萃取出的蛋白質濃度看來有點稀，可能是因為萃取方法不太適當。
您考量的trypsin會影響蛋白濃度測定，理論上是會影響的，
要實際證明，直接把trypsin拿去測蛋白質濃度就可知道。
BTW，有很多工具書和網路資料可查到萃取蛋白的方法，不妨參考一下。
還有版上的菁華區也有很多寶藏~
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◆ From: 61.62.20.55
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