[求救] western transfer後band整個漂移

看板Biotech作者 (soceress)時間17年前 (2008/10/29 20:20), 編輯推噓4(4推 0噓 9→)
留言13則, 6人參與, 7年前最新討論串1/2 (看更多)
各位好~ 目前我做的蛋白質是histone 3, 17kd以下的分子量 SDS page的過程與結果都正常 但transfer後 (溼式,tank是接cooler,120V,90min, transfer buffer中無SDS,含MeOH 20% ) 我的PVDF膜,20多kd以上的marker整個漂散開,像水彩畫那種暈染的感覺 方向是往內的(延伸到第5個lane),不是漂向外側 之前也有些微飄移,但這次格外嚴重 雖然目前不影響到17KD以下,但之後會再做到大一點的分子 想請大家幫幫我,是哪裡出問題? 任何小細節都好! 或是哪一家glycine不好用之類的都好.. 感激不盡!!!! --- murmur...在唸碩士班時從沒遇過這種問題說...^^|| -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.165.218.62
推
10/29 20:45, , 1F
確定Gel跑起來沒這現象??
10/29 20:45, 1F
推
10/29 20:58, , 2F
看一下是不是沒有夾緊,或是transfer的過程中膠縮了
10/29 20:58, 2F
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10/29 21:24, , 3F
嗯,確定gel跑起來很美很正常
10/29 21:24, 3F
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10/29 21:38, , 4F
有夾緊, 但請原諒我才殊學淺..請問膠縮的原因有哪些呢??
10/29 21:38, 4F
推
10/29 21:42, , 5F
有圖嗎?附上來比較好討論.不過縮膠的問題很多耶
10/29 21:42, 5F
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10/29 21:44, , 6F
而且感覺你只有這次特別嚴重.手感很重要!!!
10/29 21:44, 6F
推
10/29 21:57, , 7F
1.buffer重泡 2.確認有夾緊..有時後雖然要放進tank
10/29 21:57, 7F
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10/29 21:58, , 8F
前的確有夾緊 但是跑完之後拿出來看就會漂漂的..
10/29 21:58, 8F
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10/29 22:00, , 9F
至於原因..filter再插入時滑掉(太大張卡邊) 或者海綿
10/29 22:00, 9F
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10/29 22:01, , 10F
變薄(用久的會越用越硬薄)..不然就tank過熱膠變大..
10/29 22:01, 10F
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10/30 03:53, , 11F
謝謝大家的幫忙~明天我會把它拍下來~~
10/30 03:53, 11F
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11/11 01:06, , 12F
前的確有夾緊 但是跑完 https://muxiv.com
11/11 01:06, 12F
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01/03 16:47, 7年前 , 13F
1.buffer重泡 http://yofuk.com
01/03 16:47, 13F
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文章代碼(AID): #1925J_pE (Biotech)
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