Re: 關於DNA polyacylamide

看板Biotech作者 (鴨小病毒)時間17年前 (2008/10/04 00:10), 編輯推噓11(11推 0噓 9→)
留言20則, 8人參與, 7年前最新討論串2/4 (看更多)
※ 引述《MDPV (鴨小病毒)》之銘言： : 各位前輩 : 不知道有沒有人有使用polyacylamide 跑DNA : 因為我的dna band很小 : 所以要用此方法 : 不過已經試了好多方法 : 不知誰可以救我一下 : 謝謝~~~~ : 可以附上protoc嗎 sorry 我沒有寫清楚~~~ 我DNA polyacylamide濃度如下: GEL% 20% 30% acylamide 8ml H2O 1.6ml 5x TBE 2.4ml 10%APS 200ul TEMED 10ul 以65V預跑30分鐘後，loading sample後，以65V跑4.5小時 可是我出現的問題如下: 1.我製作出的膠孔洞中會有類似纖維狀的東西 無法讓我loading東西 2.看不出想要的band 連dna marker都看不見 3.請問各位前輩 我需要像跑SDS-PAGE有上下膠嗎 4.如果我的dna只有83bp，我大概要跑到什麼位置? 因為對實驗沒接觸過 所以煩請各位幫忙 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.173.227.222
推
10/04 00:16, , 1F
配方怪怪的耶...哪來的阿
10/04 00:16, 1F
推
10/04 00:18, , 2F
感覺像是沒凝阿
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10/04 01:12, , 3F
83 bp 跑2.0%以上的agarose gel也可以分啊!
10/04 01:12, 3F
推
10/04 08:12, , 4F
通常拔下comb之後,請以buffer沖洗可能為凝結的殘留gel
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10/04 08:13, , 5F
跑DNA用的我以前是沒有用stacking gel(就是上膠)
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推
10/04 08:21, , 6F
還有跑的時間好像有點不夠,以前我run的size約100多bp
10/04 08:21, 6F
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10/04 08:23, , 7F
用15cm的12% gel,70V也要run 14 hrs
10/04 08:23, 7F
推
10/04 11:51, , 8F
dna acryamide 要用19：1的，另外不用用到20％吧
10/04 11:51, 8F
推
10/04 13:32, , 9F
配太高了，而且跑這麼久DNA不會smear掉?
10/04 13:32, 9F
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10/04 13:57, , 10F
回樓上,不會smear,不過會怕過熱,跑出的band就微笑了..
10/04 13:57, 10F
推
10/04 21:37, , 11F
molecular cloning上面有要分多少bp要用多少%gel的對照表.
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10/04 21:37, , 12F
至於跑的位子..我是看dna loading dye跑的位子決定..
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10/04 21:38, , 13F
一開始先試著跑marker, 等確定條件後再跑sample吧
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推
10/04 22:30, , 14F
1.在跑之前用running buffer把well沖一下~ 2.你的染色會不
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會已經出問題..因為你的marker看不見! 3.我們是配上下的~當
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初是跑AFLP的產物..如果是single band我認為配agarose的就
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可以了耶~我配4%的!!試試吧~
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推
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你的sample跑之前有跟loading buffer預煮過嗎!?
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11/11 01:02, , 19F
感覺像是沒凝阿 https://daxiv.com
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01/03 16:45, 7年前 , 20F
感覺像是沒凝阿 https://muxiv.com
01/03 16:45, 20F
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文章代碼(AID): #18vaF_9- (Biotech)
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