Re: [求救] competent cell製作

看板Biotech作者bolly (bolly)時間15年前 (2008/10/01 01:15)推噓4(4推 0噓 5→)

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我今天又試了一次在製作過程我都盡量在冰上處理我也是用離心管操作所以置於冰上的步驟也都是整支插進冰裡最後一步分裝好之後我拿了一管直接塗在無抗生素的菌盤上在拿另一管作transform 我的transform步驟是加入1-2ul DNA到0.2ml competent cell 置冰上二十分鐘再heat-shock 42度C 2min 接著在置於冰上5-10 min 因為是新鮮的competent cell 所以直接塗菌盤沒有作修復的動作我剛看了一下菌盤長的情況直接塗菌盤的菌長得滿滿的表示我製作過程應該是OK的菌都還活著但是有加DNA作transform的菌都沒長我猜可能的原因是氯化鈣有問題沒有成功的在菌上打洞或著是我的transform還需要作修正順帶問一下前面有幾位提到離心機的rpm 我想如果能直接說g值會不會比較好因為rpm會隨roter改變直接說g值我會比較能抓條件謝謝大家的意見 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.202.50

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qumai

10/01 01:44, , 1^F

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tsubasawolfy

10/01 08:01, , 2^F

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tsubasawolfy

10/01 08:02, , 3^F

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