[求救] 抽DNA放overnight 與不放的作用差別

看板Biotech作者 (平淡 超凡品味!)時間17年前 (2008/09/29 12:38), 編輯推噓7(7推 0噓 8→)
留言15則, 7人參與, 7年前最新討論串1/2 (看更多)
這是前天抽DNA時學長問的一個很基本的問題~ 起因是因為我第一次抽DNA時放37度overynight沒有任何沉澱物 = = 學姐說應該要有 不過很奇妙的事做到最後加異丙醇時~有些許DNA沉澱 不過量非常少就是了 我使用的方式都是用CTAB萃取蘭花的DNA~ (話說~學長說他的DNA很難抽 = = ) 與上次不同的是~這次我放65度沉澱1小時....不過一開始也沒看到什麼 是離心後才看到ㄧ咪咪的東西.... 我才剛開始學習實驗~(這也是我第二次抽DNA.......) 有很多步驟都是乖乖聽著學長姐的話照做 也有跟學長姐討論過為什麼沒有沉澱的問題~ 不過.....都沒有確且的方法 我也知道要自己去思考每個步驟的意義 & 用途 ~ 不過書上好像都沒有解釋步驟的原因~只有看到一堆的不同的potocol >"< 到底該怎麼訓練自己獨立思考的能力呢? 打到最後都不知道自己在說什麼~ 感謝看完的人 ~ 最後~再追加一個問題 抽DNA時要測幾次O.D.值~學姐交我2次 一次是要回溶 一次是要跑電泳 學長說測要跑電泳的那一次就好了~ 還說我為什麼要亂改步驟 >"< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 125.230.77.67
推
09/29 13:17, , 1F
我們都放-20 進行沉澱~沒用過37或65度的進行沉澱!
09/29 13:17, 1F
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09/29 13:19, , 2F
37或65度通常我們是用來加速溶解DNA的~測OD我們只測ㄧ次~
09/29 13:19, 2F
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09/29 13:20, , 3F
除非定量後的DNA在電泳跑的結果有差異..才會再測第二次!
09/29 13:20, 3F
推
09/29 13:24, , 4F
而且我記得低溫是促進DNA沉澱的~
09/29 13:24, 4F
推
09/29 13:28, , 5F
推樓上~~低溫促進沉澱!!
09/29 13:28, 5F
推
09/29 13:47, , 6F
雖然protocol一堆~~但是靜下心來用基本的物理跟化學知識
09/29 13:47, 6F
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09/29 13:47, , 7F
想一下為什麼這麼做~~應該很快就懂了~~~
09/29 13:47, 7F
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09/29 14:22, , 8F
謝謝大家~ 我真的太急躁了
09/29 14:22, 8F
推
09/30 00:59, , 9F
65度是為了去除DNase活性
09/30 00:59, 9F
推
09/30 17:07, , 10F
我們抽完是放-20 overnight目的要讓溶解在水的DNA析出
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09/30 17:08, , 11F
隔天離心就會有pellet了 65度1 hr是其中加完RNase後的步驟
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09/30 17:09, , 12F
讓RNase作用的 這是依我的記憶回答 有錯請指正 謝謝
09/30 17:09, 12F
推
09/30 17:12, , 13F
sorry我打錯了 RNase作用是37度1~2hr
09/30 17:12, 13F
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11/11 01:01, , 14F
謝謝大家~ 我真的太急 https://daxiv.com
11/11 01:01, 14F
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01/03 16:45, 7年前 , 15F
讓RNase作用的 這 https://noxiv.com
01/03 16:45, 15F
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