[求救]pfu taq mixture成分配法

看板Biotech作者 (小紅)時間17年前 (2008/09/22 14:24), 編輯推噓12(12推 0噓 8→)
留言20則, 12人參與, 7年前最新討論串1/3 (看更多)
各位大大好，小弟最近在從cDNA做PCR，P出想要的gene，由於片段長度約 700Kb左右，且要的cDNA片段之後再transfect到細胞中看表現的，所以希 望能達到PCR出來的片段不要有任何錯誤^^ 目前遇到的問題是，用taq能夠PCR出想要的片段，但是同樣的condition下， 用Pfu就PCR不出來，老師建議我用taq做PCR，並加入一點pfu做proofreading， 可是一加入pfu就PCR不出來了(連個band都沒有= =) 所以想請問大家，有沒有大大手上有廠商的pfu tag mixture的protocol，也就 是PCR的sample成分要如何搭(pfu加多少，taq加多少，dNTP加多少等等) 麻煩大家了，感恩~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.90.35
推
09/22 14:37, , 1F
Taq : pfu = 8:1 ~ 16:1 其他照舊
09/22 14:37, 1F
→
09/22 14:53, , 2F
請問樓上大大，我之前用8:1做不出來，所以不知道是Mg離
09/22 14:53, 2F
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09/22 14:54, , 3F
子濃度不夠還是buffer成分不對><麻煩有沒有詳細的potoc
09/22 14:54, 3F
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09/22 14:54, , 4F
ol可以幫幫我^^
09/22 14:54, 4F
推
09/22 15:12, , 5F
其實我之前遇到問題就會換一管enzyme(機率真的非常小)
09/22 15:12, 5F
推
09/22 15:13, , 6F
基本上都會做得出來 不用改protocol/condition
09/22 15:13, 6F
推
09/22 15:13, , 7F
抱歉無法幫上忙
09/22 15:13, 7F
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09/22 15:28, , 8F
謝謝你唷~感謝^^
09/22 15:28, 8F
推
09/22 20:00, , 9F
700kb 好大....
09/22 20:00, 9F
推
09/22 20:45, , 10F
哇～～700kb真的好大喔～～cDNA有這麼大到700kb的喔？
09/22 20:45, 10F
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09/22 21:33, , 11F
titin的cDNA有100kb(逃)
09/22 21:33, 11F
推
09/22 21:48, , 12F
pfu一ul的價錢可以去吃吃到飽一次 Orz
09/22 21:48, 12F
推
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哪裡的吃到飽這麼便宜？
09/22 23:06, 13F
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09/22 23:14, , 14F
試過提高 dNTP 的濃度就批出來~ 不過後來換用 Phusion
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09/22 23:15, , 15F
就沒遇過這個問題了~
09/22 23:15, 15F
推
09/22 23:19, , 16F
pfu有這麼貴-口-?
09/22 23:19, 16F
推
09/23 02:15, , 17F
禾鑫生技 pfu 超便宜又很好用！
09/23 02:15, 17F
推
09/23 11:11, , 18F
pfu的condition與Taq的不太相同,建議你看一下pfu的使用說明
09/23 11:11, 18F
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09/24 17:21, , 19F
阿...打錯...是700bp(囧)
09/24 17:21, 19F
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01/03 16:45, 7年前 , 20F
阿...打錯...是7 http://yofuk.com
01/03 16:45, 20F
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