[求救] 請問降低背景螢光的固定方法

看板Biotech作者 (abc)時間16年前 (2008/08/29 05:10), 編輯推噓3(3推 0噓 14→)
留言17則, 4人參與, 5年前最新討論串1/1
最近在做小鼠腦的切片 切片的厚度是350 micro meter 培養幾天後再染色看螢光表現。螢光是染microglia 用的是Isolectin B4。 不過 問題來了 因為腦切片的背景螢光時在太亮了 導致於裡面染的螢光幾乎微弱或跟背景融為一體 我用的固定方法是4% paraformaldehyde 之前是用先前配好的，凍在-20 度 要用再回溫 有試過新鮮配的，雖然有降低，不過還是有背景螢光， 請問有人知道還有別的好方法來固定嗎 然後還要保持腦切片的完整性 固定的時間跟濃度可否也一起說一下，謝謝了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業(ptt.cc) ◆ From: 77.8.167.209 ※ 編輯: catalyst 來自: 77.8.167.209 (08/29 05:25)
推
08/29 05:47, , 1F
不知道你有沒有用雙染，看看另外的蛋白螢光是不是背景很強
08/29 05:47, 1F
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08/29 05:48, , 2F
假如沒有的話，代表抗體專一性不好，用ED-1或是OX-42也可
08/29 05:48, 2F
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08/29 05:49, , 3F
以染到reactive microglia/macrophage…
08/29 05:49, 3F
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08/29 05:51, , 4F
假如兩種螢光背景都很強的話，考慮一下blocking時間久一些
08/29 05:51, 4F
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08/29 05:52, , 5F
以上…僅供參考…Orz
08/29 05:52, 5F
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08/29 06:47, , 6F
我是單染，然後其實它也不是抗體，只是一種蛋白質，
08/29 06:47, 6F
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08/29 06:48, , 7F
會認microglia 上的醣類 專一性應該是還ok
08/29 06:48, 7F
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08/29 06:49, , 8F
就是腦切片的內部自體螢光有點高 不過還是謝謝你的建議
08/29 06:49, 8F
推
08/29 14:43, , 9F
sorry...現在我才知道B4-isolectin不是抗體…Orz
08/29 14:43, 9F
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08/29 14:44, , 10F
你提到的是組織自發螢光…想到我以前用的玻片（乾淨）也會
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08/29 14:45, , 11F
自發螢光…所以上網請用google…打入tissue autofluoresce
08/29 14:45, 11F
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08/29 14:46, , 12F
會有一些解決的方法…以上…僅供參考…Orz
08/29 14:46, 12F
推
08/29 15:19, , 13F
植物也會有很多自發螢光(爆),通常不是用不同激發光區分
08/29 15:19, 13F
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08/29 15:20, , 14F
就是要參考看看有沒有濾色片了
08/29 15:20, 14F
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09/01 20:48, , 15F
謝謝了
09/01 20:48, 15F
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11/11 00:57, , 16F
就是要參考看看有沒有濾 https://muxiv.com
11/11 00:57, 16F
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01/03 16:44, 5年前 , 17F
sorry...現在我 https://noxiv.com
01/03 16:44, 17F
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