Re: [求救] 轉RT所加的DTT的功用
※ 引述《SIH0209 (River)》之銘言：
請問大家
在做RT-PCR時
轉RT所加的DTT是有什麼功用?
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看到這問題我第一個想到的答案跟handoluslash一樣
我的想法是認為DTT和2-ME具有相同功能，可還原雙硫鍵。
由於這個特性，DTT可用於解開thiolated DNA所形成的dimers結構，
因此推測DTT用在RT步驟，是要解開RNA的二級結構。
不過，有網友說，mRNA不具雙硫鍵。
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/4770.html
(But normally there is no disulfide bond in the mRNAs.)
所以看起來我這個推論，應該是不成立的。
後來看到ookubo的想法，發現我從未考慮到RT酵素活性這一點。
我感到有興趣的是，DTT常用來造成蛋白質變性。
至於它用在延遲酵素活性降低的功能是常見的嗎?
是否在酵素動力學實驗中也會添加DTT呢?
剛剛google發現了第三種說法
http://www.5ibio.com/html/RNA/RNAi/20071018/12918.html
最常用的RNA酶抑制剂Human Placental ribonuclease inhibitor（HPRI）是一种蛋白质
，可与多种RNA酶（包括RNases A, B, C类）非共价结合成为等摩尔复合物，抑制RNA酶活
性。HPRI需要在DTT存在的条件下保持最大活性。
http://www.promega.com/pnotes/61/6222_30/6222_30_core.pdf
顯示某些RNase inhibitor需在DTT存在下作用。
http://0rz.tw/d84Hi
Although RNaseOUT™ requires DTT to be active, it is stable if added to a DTT
free buffer and used immediately. If the RNaseOUT™ is diluted in the absence
of DTT, and held for any period of time it's activity will suffer.
http://www.ambion.com/techlib/resources/superasein/
Figure 3.說明某些RNase inhibitor需在DTT存在下才有較好的作用效果。
當然就會有廠商推出標榜不用DTT，依然很厲害的RNase inhibitor。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.20.55
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