Re: [求救] protein induction的結果一直很奇怪
※ 引述《nk12914 (尋找)》之銘言：
: 最近在做induction實驗
: 用的是pET23a vector
: host用過BL21(DE3)跟pLysE兩種
: IPTG final濃度是1mM
: induction條件是37度C或30度C 三個小時 (五個小時也有try過)
: protein size大約47kD
: 可是每次做出來的結果都是
: 沒有加IPTG的 BAND的強度都比有加IPTG來的強
: 加了IPTG整條lane的band都變弱了
: 而且看起來好像是沒有induction出來
: 因為沒有很明顯粗粗的一條band
: 推測的size 附近確實也有band
: 可是就像上面說的結果 不管是空的host(沒送plasmid) 或是沒有induction的
: 都比有induction的BAND來的強
: 已經試過很多次都是這樣了
: 實在不知道是哪裡出了問題
: 可以請大家給我一些建議嗎?
: 謝謝大家
insert真的有送進去嗎？
之前我是用pET30b vector，host是用BL21(DE3)和pLysS兩種，
那時IPTG induction條件也試了很多個（溫度、時間、濃度）
但是induction後的band只有弱弱的一條，
沒加IPTG或空的host是根本不會有那個band。
我有送定序，確定我要的東西有接進去，
後來改以pET21b當vector，送BL21(DE3)，就有粗粗的一條band了。
我後來用的條件都是25度C 5hr～
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推
05/16 16:34, , 1F
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