Re: [求救] comet assay
※ 引述《chvkimo (達)》之銘言：
: ※ 引述《imbi ()》之銘言：
: : 請問做過comet assay的餅又
: : 要怎麼把low melting gel鋪平在玻片上呢??
: : 我昨天第一次試做
: : 發現最大的問題是我的GEL會呈現凸凸的(表面張力那樣)
: ^^^^ 沒遇過 是你的玻片沒有磨砂過嗎?
: : 根本無法再加一片蓋玻片
: ( 膠還沒凝固 就蓋起來了阿,為什麼會蓋不起來??!! )
: : 照相起來也很難對焦...
: : 然後就是跑膠的時候 或許是過熱了吧
: : gel竟然自己也給我漂浮的跑起來 XD
: : 還好有被我撈回來
: : 另外 實驗進行過程中有需要避光嗎
: (電泳時要避光)
: : 我看了幾各版本的PROTOCOL 有的說要 有的沒提
: : 我是不太清楚為什麼需要避光...
: : 還請板上的先進給我一點建議了 謝謝!
我做comet assay的經驗不是很多
也許沒有辦法完全解決您的問題
但是我試著提供自己的經驗與想法供您參考
就像C大所說 cover slip是在gel load到slide上之後 立刻蓋下去的
如果蓋了之後還會凸凸的(中央高 周圍低?) 那我想可能會有幾個原因
1. 蓋得太慢
2. gel濃度太高
3. gel loading量太多
以至於cover slip無法將gel壓平冷卻
至於對焦很難對到的問題
我想gel再怎麼薄 也會超過一個cell的直徑
cell在gel中不會只分布在一層
不過只要gel不要太厚 照相時移動視野 也只要微調焦距即可
應該不會造成很大困擾
倒是跑膠時gel漂起來 根據我以前的經驗
應該是磨砂玻璃抓gel的效果不好
有的slide就是抓不住gel
以至於我每次做完實驗都要乖乖快點把slide洗乾淨
因為好用的slide很難找 XD
另外 關於避光
如果是指染色前的避光 (螢光染色要避光是理所當然的)
我聽過有人是認為要避免日光燈或是陽光中UV影響實驗結果
尤其是電泳前還要作in-gel digest時
我們總是希望DNA damage都是來自於自己可以掌控的實驗設計嘛~
不過根據我以前的實驗經驗
避不避光好像沒差 XD
以上供您參考
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※ 編輯: myrna 來自: 61.231.11.4 (05/04 23:29)
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