[求救] 抽不到RNA

看板Biotech作者ayinie (諸事不順啊~~~)時間16年前 (2008/03/03 20:26)推噓6(6推 0噓 7→)

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我是從組織抽RNA來測是否有感染某病毒以前抽RNA一直都沒問題可是這陣子老是抽不到就是連β-actin都沒有我不知道問題出在哪? 我都是照實驗室"祖傳"步驟在做先排除掉DEPC水和tip等器材是否污染的問題因為實驗室其它人在抽也都是用同樣的設備同樣的DEPC水可是他們都抽得到我目前發現一個問題就是加完isopropanol放置-70度超過20分鐘後離心離心完都會有白白的pellet 學姐說她們做也會有可是她們的pellet在酒精沉澱後烘乾時就會熔掉了或者烘乾完加了DEPC水後pellet也會自動溶掉問題來了我的pellet根本溶不掉!! 我重做了好幾次有的sample最後總算有抽到有的sample仍舊沒有我發現pellet有溶掉的最後跑RT-PCR都跑得出來可是pellet沒溶掉的就跑不出東西來了就是連β-actin都沒有酒精沉澱後我以50度加熱到整個eppendorf完全乾掉但是pellet仍舊沒有熔掉加入DEPC水後以手指敲打有的pellet總算溶掉有的還是溶不掉繼續加熱一陣子pellet還是溶不掉奇怪的是我抽RNA也抽了半年有了之前都沒這問題呀學姐說pellet溶不掉表示那是蛋白可是前面用trizol和chloroform沉澱蛋白的步驟我都沒有做錯離心完吸取上清液也絕不可能吸到蛋白層(因為上清液很多) 我快瘋了啦~~~~ 我完全不知道問題出在哪為什麼會有那些溶不掉的pellet?! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.117.178

推

aggaci

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ayinie

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ayinie

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