Re: [問題] 關於gene knockout mice過程毛色的問題
※ 引述《antisense (sense)》之銘言：
: ※ [本文轉錄自 Biology 看板]
: 作者: antisense (sense) 看板: Biology
: 標題: [問題] 關於gene knockout mice過程毛色的問題
: 時間: Tue Feb 5 13:39:54 2008
: 【問題】：
: 請問教科書上面，將已作過one copy gene targeted的ES cell，放入psudopregnant mother
: 後，產生的後代，是chimeric mice，然後再將chimeric mice與正常的mice交配，來產生
: 最終的gene knockout mice
: 【問題起因】：
: 1 為何要利用chimeric mice與正常的mice交配，不直接讓chimeric mice之間相互交配產
: 生two copy knockout?
幾個理由
1.你的chimera的germ cell不一定會有target進去的gene
所以直接配不一定會拿到-/-的老鼠
而且就繁殖策略上 直接拿到-/-也不是最理想的方法
2.你要的strain的老鼠 不一定是打進去ES cell那個strain
3.另一個理由是chimera不便宜也很難拿到
你要做microinjection把ES cell打到embryo裡面
再implant到uterus裡 等chimera出生 19~21天
所以是先拿chimera(通常是公的)跟wild type(母)配
運氣好拿到的whole body該基因都是+/-的mice
就可以說拿到germ line了 之後再依實驗的需求做backcross
: 2課本上說，chimeric mice和正常的mice交配，產生的knockout mice整個過程的基因型，
: 及毛色的表現型，到底是如何？
: 【個人看法】：
是這樣 embryo跟ES cell通常是兩種不同毛色的老鼠提供
比方embryo是C57B6(黑) ES cell是129SV(白)
那麼做出來的chimera 就是灰的 或是黑白毛色一塊一塊
像下圖
http://140.112.133.74/0607/pic5.png
這時可以用毛色判斷ES cell佔chimera的比例多高
當然越高你拿去配得到germ line的機率越高
做完genotype 確定拿到germ line後
再把germ line的老鼠跟你要的strain的老鼠做backcross
這個樣字大概五代之後 你的老鼠除了knock-out的gene
其餘的都會跟你要的strain一樣
以embryo是C57B6(黑) ES cell是129SV(白)來說
Genotype 毛色
Chimera (有些是+/+ 有些是+/-) 花or灰
F1 (+/- ,whole body) 逐漸變黑
F2 (+/- or -/- ,whole body) 黑
就這樣 #
--
如果孔子是那待沽的玉
我便是待斟的酒
用一生的時間 蘊釀自己的濃度
只為等待剎那的傾注
張曉風 釀酒的理由
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 221.169.50.122
※ 編輯: boyo 來自: 221.169.50.122 (02/05 16:55)
※ 編輯: boyo 來自: 221.169.50.122 (02/05 17:01)
推
02/11 16:10, , 1F
02/11 16:10, 1F
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 2 篇)：