Re: [方法] isolation murine primary macrophage
※ 引述《changyaowen (研究生活)》之銘言：
: ※ 引述《changyaowen (研究生活)》之銘言：
: 哇~~~~沒人做過喔
: 有板友要分享一下的嗎
: : 請問有板友做過這類的分離實驗ㄇ
: : 一起來討論一下
: : 我的目的 分離出mouse的peritoneal macrophage
: : 然後將primary cell immortalization 變成cell line
: : 我看了幾遍紅皮書(current protocol)的做法
: : 打入TG 等7~10天 用medium去沖洗腹腔中的細胞 離心 culture
: : isolation遇到的問題
: : 1. 在沖洗的過程 常常會去吸到組織或脂肪 非常不容易吸出medium
: : 2. 只要針一出體外 要再進去基本上很會漏medium
: : 3. 洗的過程 有時會不小心去吸到血液 應當是碰到血管了 有好的避免方法ㄇ
: : 4. 外觀可看出腹腔中還有不少的medium 只是吸不出來
: : 其他就是 culture過程 有板友有照過圖可以看ㄇ
: : 還是用怎樣的方法去assay該cell是你要的macrophage
: : 一起討論一下罷
: : ============================================================================
看十次紅皮書...不如自己多親手做幾次喔 多做就會熟了
打TG之後有點等太久了，一般paper/protocol上差不多是 3% 1.6ml 三~四天
lavage過程 1ml針頭打入約 5ml medium 後，使用 5ml 針筒抽取
抽取點基本上從腹膜中央入針，針頭移動到腹腔右上方處抽取為佳
(左上方會有很多脂肪組織)
手穩一點應該是很順就可以全部抽出來了
加油...等到有一天抽一隻十分鐘你就離畢業之期不遠矣
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