[求救] flag-tagged protein expression

看板Biotech作者anchi35 ( )時間18年前 (2008/01/26 14:26)推噓3(3推 0噓 2→)

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請問各位高手目前在進行flag-tagged protein的實驗實驗大致如下質體以superfect送入到PC3 cell 養overnight 將細胞lyse後15000rpm 離心20min 取上清液 Control組 : PC3 cell lysate only 實驗組 : Flag-tagged protein 1 75kDa (我主要在測試的) Flag-tagged protein 2 20kDa (實驗室學姊的,這組算是用來測試transfection 是否成功) 做western 用的抗體是Sigma Monoclonal ANTI-FLAG M2 monoclone antibody 1:500 結果出現一些雜band (control組也有) protein 2有大量表現 protein 1則沒有可是比較3組扣除都有出現的雜band Flag-tagged protein 1那組有多出兩條約40-50kDa大小的band 請問這有可能是protein 1 degrade? 還是也只是雜band 而我要的protein 1根本不表現如果是根本不表現請問可能原因為何? 該如何使它表現? 謝謝各位的回答及指教 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.231.125.157

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bluecsky

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bluecsky

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soom

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