Re: [求救] 冷凍切片
※ 引述《nidus (咕嘰)》之銘言：
: 我用的波片是dako poly-L-lysine coating micro slide
: 切完片後
: 放在有乾冰的保溫箱中
: 帶回實驗室
: 用PBS wash
: 發現組織薄片全部都漂浮起來了ㄟ= =a
: 請問有沒有大大知道用什麼方法可以克服這個問題
: 謝謝
我想這種實驗的問題只有自己才能抓到問題在哪。
因為有太多的參數板友們是無法知道的。
影響的因子太多，比方說：
1. 樣本是什麼組織？
是否該組織其表面就不容易黏附在 poly-lysine 上
(別人有沒有人切過這種組織，實驗室學長姐有沒有人切過？
結果又是如何？)
2. 包埋是用什麼 medium？
是否該 medium 有特殊的性質，導致組織不容易黏附到 poly-lysine 上
(同理，其他人用一樣的 medium 也有發生這事情嗎？)
3. 切片的厚度是多少？
是否組織的厚薄程度影響黏附的緊密程度
(也跟該組織的特性有關)
4. 切片完是否有先風乾？
該 medium 是否回溫完全溶化，而水分是否充分被風乾
5. 所謂的 "wash" 是怎麼 wash？
用 pipette load 在旁邊，還是整個 dip 進染色壺裡頭
還是有其它方式
我的作法：
組織先使用 paraformaldehyde 固定。
固定後使用 tissue freeze medium (Jung) 包埋。
切 10-20 micron，section 放在 poly-lysine 玻片上。
讓玻片在室溫風乾。(若需過幾天再看，風乾後放 -20 度)
之後用垂直浸入 (dip) 染色壺的方式洗去 medium。
加 mounting reagent (若要保存的話，否則加 PBS)，蓋上蓋玻片。
結論：
我的作法是確定風乾後使用 dip 的方式洗去 medium，
組織不會脫離，不需要使用 acetone。
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