切膠回收做PCR

看板Biotech作者 (颱風也喜歡放假)時間16年前 (2008/01/03 14:35), 編輯推噓5(5推 0噓 5→)
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想請問板上的各位 有將PCR產物做膠回收然後再進行PCR嗎? 目前遇到的情形是 膠回收完的產物再進行相同條件PCR時 在跑膠確認時,沒有看到任何的band 重複做過幾次,情形依然 想請問在做完膠回收後 再進行PCR時 有什麼條件特別要求的嗎? PS..膠回收是使用Kit做的 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.130.98.139
推
01/03 14:55, , 1F
請問這樣有意義嗎,為何不拿產物稀釋式之後再跑一次?
01/03 14:55, 1F
推
01/03 15:41, , 2F
有吧.他可能想用膠分離想要的產物吧.
01/03 15:41, 2F
推
01/03 15:58, , 3F
有時後第一次p太少，就要純化p第2次
01/03 15:58, 3F
推
01/03 23:32, , 4F
要增加PCR的片段以及確認產物的完整性，通常是primer設計上
01/03 23:32, 4F
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有加入限制酶切位，為了確定切位的sequence有接上
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01/03 23:36, , 6F
原PO的情形可能在回收的時候產生lost，在回收後先確認產物
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推
01/05 12:40, , 7F
你的情形我遇過~之前作overlap PCR 時 跑出的band約
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01/05 12:42, , 8F
三條 為了得到我要的片段就將它回收後再跑一次
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01/05 12:43, , 9F
總覺得理論上就拿得到我要的major band~不過從來沒成
01/05 12:43, 9F
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01/05 12:44, , 10F
功過。全都是smear 我猜測可能產物真的太雜了
01/05 12:44, 10F
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文章代碼(AID): #17V897Yu (Biotech)
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