Re: [求救] 有關二抗的問題anti-Rat IgG2a & IgG2b
※ 引述《sinwam (sinwam)》之銘言：
: 昨天幫你問了一下別人,他的答覆是不行!!
: 他說:很少人抗體是anti-rat IgG2a or 2b,因為意義不大,
: 而且不可能在同一片western上分別rat IgG2a and 2b,
: 他建議你換rabbit & rat 的一抗,才有可能在同一片western上看到,
: 不然就用同一個二抗 可是要在不同的western片子上看,
: 一般2抗只有anti rat IgG(H+L) or IgG Fc or IgG F(ab')2 or IgG+IgM (H+L) or IgM
: mu chain specific
: 這是他昨天給我的答覆內容!!你參考看看吧!!
我想 真的是有二抗是 IgG2a or IgG2b
(因為本人有用過 大家不要學.....)
以前的二抗分門別類的很細
(因為這是老闆在她博士班留下來的...所以有大於10年以上)
現在可以選用 IgG 的來接合 2a or 2b
另外 介紹一家 我最愛的二抗 Jackson 啥都有 效果好 保存好可以放N年
http://www.jacksonimmuno.com/home.asp
其實 Western blot 也是變相的 IHC (都是抗原跟抗體....)
做雙重染色(兩種抗體)或是三種以上 都是可能的
只是要怎樣去把非專一性結合去除
前一段時間 我把位置在 45 跟 55 的兩種蛋白 同一張membrane上
同時染 兩個不一樣的抗體 (都是Rabbit anti-rat)
不過一開始 我是分別做 跟我後來趕時間 兩個加加一起 出來的結果一樣
這可能是我要慶幸的囉~~
(不過 我有先確定過 再加在一起反應看看)
反過來說 如果剛好這兩個一抗一個是IgG2a and IgG2b
那我就可以用兩種二抗囉 @.@
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以上是我肚子餓亂說 試試看囉
: ※ 引述《piparing (批哩啪啦)》之銘言：
: : 最近要使用兩支Monoclonal antibody來做Western blotting
: : 一支的Ig class是rat IgG2a
: : 一支是Ig class是rat IgG2b
: : 所以二抗理當要用goat(or other species) anti-rat IgG2a
: : 以及goat(or other species) anti-rat IgG2b
: : 但是這種針對IgG2a以及IgG2b的抗體很少且非常昂貴
: : 不知道我可不可只使用goat(or other species) anti-rat IgG這隻抗體
: : 來分別偵測rat IgG2a以及rat IgG2b
: : 這樣可以成功嗎?
: : 或是有人能建議使用anti-rat IgG Fab or anti-rat IgG Fc ?
: : 希望有經驗且知道的版友能夠分享經驗 :)
: : 也希望能提供可以做出來的antibody廠商
: : 非常感謝!
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