[求救] 藍白篩 全都白><

看板Biotech作者 (丹丹)時間18年前 (2007/12/18 21:27), 編輯推噓7(7推 0噓 17→)
留言24則, 7人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
先前有問過X-gal的問題 我的老師還是很堅持要我用DMSO 因為DMF 如大家所知 是管制藥品 用多少 得紀錄多少... 雖然我有上教育訓練 可以操作 但 我的老師 還是希望 能用DMSO就用DMSO...>< 問題來了.. 我已經畫了超過50個plate.. 每個plate 都長菌 可是全都是白的..(￣__￣；) X-gal是粉劑 新的 DMSO 有些時日..(從我大學進這實驗室就有了 至少四年) 一切操作 都避光 有用錫箔包 操作台也沒開日光燈... 因為T/A clony是用Kit vector ligase等藥劑都是算好的量 也因此 我PCR:vector 並沒有估量 (沒有跑電泳做濃度check) 想請問大家 到現在 全部都是白的><..可能會是什麼問題? 真的很白喔!! 不是淺藍.... 希望有經驗的人 能給予點意見 感激不盡!! -- ★*'`"*☆ 相簿人氣 就像P幣 ☆*'`"*★ http://www.wretch.cc/blog/gwendiline 努力經營 總是希望有人來咩 @^_^@ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.192.30
推
12/18 21:38, , 1F
白不是好事嗎?..還是連應該藍的control都是白的?
12/18 21:38, 1F
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12/18 22:08, , 2F
我沒做control>< 因為competent cell 只要一溶解 100
12/18 22:08, 2F
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12/18 22:09, , 3F
micro全要做完 我覺得很浪費..我也知道這是不對的
12/18 22:09, 3F
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12/18 22:10, , 4F
還是有更好的方法嗎?>< 我是買益生的competent cell
12/18 22:10, 4F
推
12/18 22:13, , 5F
請把100ul多分幾管做就好了，反正用不著全部塗plate
12/18 22:13, 5F
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12/18 22:17, , 6F
我們一管115ul左右，每次分用10~20ul就用的嚇嚇叫了
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12/18 22:23, , 7F
樓上 請問一下唷~ 溶解後分裝 可以不失效果嗎??
12/18 22:23, 7F
推
12/18 22:24, , 8F
順便請問一個問題,competent cell要跟哪一家買
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12/18 22:24, , 9F
比較好呢?請大家推薦一下,Heat shock用的,謝謝
12/18 22:24, 9F
推
12/18 22:28, , 10F
如果是益生的competent cell理論上可以回溶好幾次不會影響
12/18 22:28, 10F
推
12/18 22:32, , 11F
competent cell不是可以自己做
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12/18 22:32, , 12F
效率, 沒忘了加IPTG吧?X-gal與IPTG濃度有沒有算錯?可以將
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12/18 22:35, , 13F
plate放在4C冰箱,beta-glactosidase會繼續反應,顏色會變深
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但是colony不會變大.理論上不太可能都是白色菌落,之前曾發
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12/18 22:38, , 15F
生益生的competent cell本身就具有抗藥性,可以測試一下.
12/18 22:38, 15F
推
12/18 23:43, , 16F
IPTG X-gal都有加而且濃度沒錯的話
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收plate後先放4度約一個小時..表現就應該很明顯了
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你應該做一些control看是不是真的跑不出藍色
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還有這種comercial的competent cell可以分裝的
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我得確有幾次做的結果是完全沒藍色..運氣好吧
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但是colony也不多就是了
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12/18 23:56, , 22F
IPTG等藥劑 濃度都沒錯 放過4度了 仍然是白色..@@
12/18 23:56, 22F
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12/19 00:00, , 23F
另外感謝各位的經驗~也謝謝Y大告訴我益生可回溶的資訊
12/19 00:00, 23F
推
12/19 18:53, , 24F
你白色菌落後來有抽出plasmid嗎?
12/19 18:53, 24F
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文章代碼(AID): #17Pyg_9j (Biotech)
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