※ 引述《rick0622.bbs@ptt.cc (olliestrong)》之銘言：
> ※ 引述《rick0622 (olliestrong)》之銘言：
> : 請問一下 blocking的意思是什麼阿??一直找不到
> 不好意思 我好像沒說的很詳細 我是想問說SDS-PAGE這個實驗裡的
> blocking 步驟是什麼意思??
SDS-PAGE 這個實驗技術裡面不會用到 blocking
我猜你說的是 western blot 這跟 SDS PAGE 雖然經常是連在一起用的技術
但實際上是兩件事
而要了解 WB 的 blocking, 要先回想一下 WB 的原理
你有興趣的蛋白質先 bind 到了 membrane 上的某個位置
然後用 primary Ab 去辨認它
然後用 2nd Ab 去辨認 primary Ab
然後再去偵測 2nd Ab 的特性（酵素活性或是螢光）
現在問題來了 既然你有興趣的蛋白質可以 bind 到 membrane 上
那你憑什麼認為 你的 primary Ab 只會 bind target protein
而不會也 bind 到 membrane 上？
同樣的，又憑什麼認為 你的 2nd Ab 只會 bind primary Ab
而不會也 bind 到 membrane 上？
blocking 就是為了解決這樣的疑慮
因此在加入抗體以前 先把 （應該）已經 bind 上你有興趣的蛋白質的 membrane
泡到一些亂七八糟的蛋白質裡面
例如牛奶, albumin, normal serum 都有人用
這樣一來 就算你的 membrane 會無專一性地去亂 bind 蛋白質
在 blocking 之後 這張 membrane 上也已經沾滿了亂吸八遭的蛋白質
而不會再去 bind 你的抗體了
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不過在時作上 有些 membrane 在 transfer 以後就不會再 bind more protein 了
因此 blocking 可以略過而不會影響結果太多
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