Re: [方法] degenerating primers
應用
抗體研究方面的應用我不是很清楚,不過一般來說最常用來釣基因。
假設你想要研究一個在該物種沒有被研究過的基因,流程如下:
蛋白質體 > 質譜比對 > 有興趣的蛋白 > 資料庫序列比對 >
找出此蛋白的保守片段 (conserved domain) > 用此片段設計
degenerate primers PCR 放大該基因
原理
其中因為氨基酸的 codon 有很多種可能,所以要排列組合作出
各種可能的 primers,故稱之。
邏輯
保守片段一般來說是同一類蛋白質皆具有,且變異性最小的區域。
有錯請指正
※ 引述《chengtachun (>0<)》之銘言:
: ※ 引述《er230 (snow)》之銘言:
: : 請問有人知道這個方法的的原理和應用嗎
: : 最近需要接觸這方面
: : 但卻找不太到相關參考資料
: : thx~
: 用來放大一段有規則的基因,我舉個例子會清楚點
: 例:你的目標基因X,Y,Z sequence如下
: type 1 :XXXXXXXATCGATCGATCGATCG.....
: type 2 :YYYYYYYACCGACCGACCGACCG.....
: type 3 :ZZZZZZZATGGATGGATGGATGG.....
: primer:ATCGATCGATCGATCG.....
: CG CG CG CG
: 你不知道X,Y,Z的DNA sequence,或是X,Y,Z間的變異性太大很難設計primer
: 那就後(前)面一點點發現DNA sequence有點規,
: 就設計像上面的primer一樣,跟廠商說你要某個bp要同時有多種nucleotide
: ,這樣就是degenerating primer
: 常用在放大抗體的variable region,
: 方法就是由constant region設計primer
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