Re: [求救] SDS-PAGE跑出來非常醜

看板Biotech作者 (福小花是我家熊貓)時間18年前 (2007/11/25 18:39), 編輯推噓9(905)
留言14則, 8人參與, 最新討論串3/6 (看更多)

11/23 22:46,
有圖嗎?這樣講很難判斷~太多可能的因素了!
11/23 22:46

11/23 22:47,
不過這樣子看應該還是製膠的問題...
11/23 22:47

11/23 23:38,
覺得是buf的問題
11/23 23:38

11/24 00:02,
well先用running buffer沖乾淨再loading試看看...
11/24 00:02
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 請問這是什麼意思?

11/24 00:23,
running buffer是「新配」的嗎?還是有用過?如果有用過,換.
11/24 00:23
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 我們實驗室的running buffer是一大瓶stock 平常要使用的時候再自行稀釋 用完就倒掉不回收 所以...這樣算新的吧?!

11/24 00:34,
把"殘骸"還送上來讓大家評鑑評鑑...XD 有染色的更好
11/24 00:34

11/24 11:33,
有氣泡所以跑的時候撞上了?
11/24 11:33
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 請問這是什麼意思? 另外我看了一位板友的回文所附的網址 我覺得我的比較像這個 http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/gelgoofs/bizarre.html#2 sample 2 它上面的說明是電流太大以及過熱 可是我以往用同樣的條件去跑(120V/90min)就沒有這情形 這次改用150V/20min;100V/90min的兩段式跑法也是一樣歪七扭八 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.209.190.2 ※ 編輯: ayinie 來自: 210.209.190.2 (11/25 18:39)

11/25 18:46, , 1F
如果你覺得是換buffer之後開始的,是否你有搞錯濃度,看錯配
11/25 18:46, 1F

11/25 18:47, , 2F
方,或者像Tris base拿到Tris-HCl等,因為問題是這時候發生的
11/25 18:47, 2F

11/25 18:49, , 3F
至於電壓,160V/70min是我常用的條件,是也沒有這種狀況
11/25 18:49, 3F

11/25 19:05, , 4F
Tris的問題可以排除 搞錯濃度也沒有 配方也沒看錯
11/25 19:05, 4F

11/25 19:40, , 5F
你sample的buffer是什麼? 確定可以跑 SDS-PAGE嗎?
11/25 19:40, 5F

11/25 21:27, , 6F
Tris-base跟Tris-HCl只差別在pH值而已,其實都是Tris=-=
11/25 21:27, 6F

11/25 21:28, , 7F
要注意的是配出來的BUFFER的pH是否正確,濃度是否正確
11/25 21:28, 7F

11/25 21:41, , 8F
跑之前用running buffer沖洗一下well內,可以用針筒或pipette
11/25 21:41, 8F

11/25 21:43, , 9F
因為gel凝固後會有些水份被擠出來,讓well內有些雜質。
11/25 21:43, 9F

11/25 22:59, , 10F
不過你的marker很正常阿
11/25 22:59, 10F

11/25 23:28, , 11F
PS:不是懷疑電壓過高嗎?怎你又用更高的電壓=-=
11/25 23:28, 11F

11/26 00:24, , 12F
sample buffer
11/26 00:24, 12F

11/26 01:26, , 13F
SDS濃度錯誤?因為前陣子實驗室才發生過類似的情形
11/26 01:26, 13F

11/26 01:27, , 14F
那次是因為SDS濃度只有正常的1/10,跑起來連marker都像海鷗
11/26 01:27, 14F
文章代碼(AID): #17IL3N8P (Biotech)
文章代碼(AID): #17IL3N8P (Biotech)