Re: [問題] Transfection一直失敗~~
※ 引述《chiehchieh (可不可以成熟點)》之銘言：
: ※ 引述《las1226 (las)》之銘言：
: : Transfect到HEK293
: : 我送的plasmid有0.4ug beta-gal和1ug 帶有promoter的plasmid
: : 首先是lipofetamie和OPTI作用5min
: : 之後加入plasmid和OPTI和lipofetamine(in OPTI)作用20min
: : 就把他加入細胞中(cells in OPTI)
: : 8hr後換成DMEM(containing 10%FBS)
: : 再過40hr 收cell lysate
: : 可是最近幾次實驗都無法repeat出之前的結果
: : 連positive control和internal control感覺都測到background
: : 不曉得哪裡有問題...難道是reagent嗎?
: run DNA gel看你的plasmid有沒有degraded
這我待會跑看看
: 8hr之後試試看不要換DMEM 改成用加的
有試加DMEM(containing 20%FBS)
: cell lysate收完了是直接做luciferase and b-galactosidase assay嗎還是冰在-80??
: 冰在-80
cell confluency有達到80-90%當你做transfection的時候嗎?
大約75%左右
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