Re: [問題] 請問一下cloning的問題

看板Biotech作者kvw (Je t'aime)時間18年前 (2007/09/03 22:01)推噓3(3推 0噓 6→)

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※ 引述《kvw (Je t'aime)》之銘言： : 標題: [問題] 請問一下cloning的問題 : 時間: Mon Sep 3 14:42:10 2007 : : 最近從LB agar上挑白色單一菌落 : : 到LB broth(含AMP) overnight培養 : : 但是很難將菌液搖到混濁耶 : : 似乎都是不長 : : 也確認過所挑的應該不是衛星菌落 : : 因為養16~18 hrs就挑了看型態也不像是衛星菌落 : : 有人有遇到這樣的情形嗎? : : -- : ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) : ◆ From: 192.192.90.211 : 推 KittyGod:會不會是雜菌啊?污染的雜菌長出來可能也是白色的 09/03 16:49 : 推 kvw:可是可以在含AMP的LB agar上長的機會也不大吧 09/03 18:16 : 推 intotheman:十之八九是盤失效了你看看那些菌落是不是大小顆 09/03 19:45 : → intotheman:基本上有沾到菌就養得起來雜菌通常不是沒長就是長不好 09/03 19:46 : 推 mojimoji:跟我今天碰到的問題一樣 xd.. 09/03 20:15 : 推 enisx:你用在LB/amp plate上的Amp失效了! 所以挑的是雜菌 09/03 20:56 : → enisx:簡單判斷的方法是:與你當初的competent cell的 colony比較 09/03 20:57 : → enisx:長的不一樣,或是較小,或是有許多衛星細胞的話,那就是Amp die 09/03 20:58 : 推 kvw:那我之前所挑的菌有些會長有些不長也是因為這個原因囉? 09/03 21:48 謝謝大家的解答再問一下所以我之前實驗挑的white colony 有些長有些不長 (接種在不同批配置的LB agar) 也是因為AMP失效的關係嗎? 那次的菌落不是很多有沒有可能AMP效能減低但卻沒有完全失效所以還是有雜菌但卻不是那麼多因為的確這次的白色菌落實在太小了而且數目有點多讓我感覺不是那麼踏實應該是真的AMP失效了害老闆還以為transformation的效率大幅提升 Orz 還有一個問題就是LB agar溫度太高是讓AMP失效的原因嗎? 因為autoclave完後水浴一下就加進去了但是剩下的AMP加在LB broth中卻是可以抑菌的所以真的要確實降到50度再加進去嗎? 還是大概就可以了? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.90.211

推

intotheman

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