[求救] ligation 接不起來?

看板Biotech作者vai (for the love of god)時間18年前 (2007/07/28 11:33)推噓4(4推 0噓 1→)

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大家好! 小弟有一問題想問困擾我好久了T.T 我在clone一段2k 的promoter 序列想把他接到5k的reporter vector 上 2k這insert先TA cloning 後有用兩邊的primer 送過定序了序列正確且設計在primer 上兩邊的cutting site 也都有然後想要把他接到5k的vector 上時就出現問題了重做了一個多月約四, 五次了每次接完 transform 抽mini RE check size 時理論上要出現我的2k insert 與5k backbone 但每次出現都有"3K" 的 band !! 對就是3k 每次都有!!! 這幾次出現的band 有過" 2k 3k" " 2k 3k 5k" " 2.2k 5k"這三種pattern 5k 跟2.2k(2~2.5k中間@@)的情形中 2.xk的band跟5k的比起來淡很多有點怪其它"2k 3k" 或 "2k 3k 5k" 的時後所有的band 都是一樣亮的本來想說會不會是混到TA cloning中的pGEMT vector( 正好是3k ) 但重試了很多次應該不會每次都切的時後混到吧T.T 然後這些sample 送定序時發現定回來的1k多序列全部都是我的5k backbone序列代表完全沒有接進insert 那這樣子每次都出現的2k又是什麼 3k 又是什麼T.T 快想破頭腦了還是搞不懂希望大哥大姐們能夠給小弟指點一點迷津啊太感謝了!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.166.111.127

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lssdai

07/28 13:03, , 1^F

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jazzdevil

07/28 13:10, , 2^F

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vai

07/28 16:48, , 3^F

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