Re: [問題] 抽plasmid 失敗好幾次了
※ 引述《anneying (12)》之銘言：
: 最近抽plasmid 測出來的260/280都好高
: 最高到2.3 而且plasmid的濃度都是之前的好幾倍
: 想說是不是菌養太多了，使的RNAse 作用不夠力 才會讓ratio過高
: 想請問大家起初在挑colony 的時候 ，都是先在LB agar上面養多久阿?
: 挑多大的colony呢?
: 我用的是GIAGEN MAXI 之前抽出來都可以用，最近已經失敗好幾次
: 所上8月底要review，抽不到plasmid根本不能做實驗
: 請大家幫忙我了 拜託!! 謝謝!
不論是 DNA 或 RNA 都是看 260 的吸收啊！(280 是看 protein)
所以 260/280 ratio 高和有沒有 RNA 污染應該沒有太大的關係吧！
有沒有 RNA 污染，其實跑個 agarose gel 就很清楚了
如果有，會在約很低分子量的地方 (如50bp) 有 smear 糊糊的東西
不過 Qiagen 的 kit，應該不會有這種問題才對。
至於 transfection efficiency 變差的原因也很多
我做過 260/280 只有 1.6的，也是可以做哩 (呵呵 ^.^||)
我除了用 260 測濃度 (OD值 * 50 * 稀釋倍數)
也會再跑個膠和 marker 比較看看
transfection reagent 好像都要和 DNA 做一定比例的混合
太少或太多都做不出來喔！
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