Re: 有人用過MEF做過adipocyte differentiation嗎
※ 引述《studyno1 (汲取知識)》之銘言：
: 我現在用的是E1A-transformed MEF cell 所以有immortality 特性
: 當細胞長滿的那一天(day 0)我開始加induction medium 2 天
: induction medium:1% P/S
: 10% FBS
: 0.5mM IBMX
: 1uM Dex
: 10ug/ml insulin
: 10uM troglitazone
: DMEM
: 兩天後換成含10ug/ml insulin. 1%P/S. 10%FBS的DMEM
: 之後我發現medium的顏色變化很快速 所以我必須每天換含insulin medium
: 我的問題是 不知道是否當初day 0的細胞就太滿(9成以上甚至全滿)
: 還是我的induction medium某成分濃度過高
: (我看過有些paper 用的insulin濃度是我的一半)
你藥加的很重
不過也無妨,這樣才分化的好,但是這樣就真的就是天天換了
: 我發現細胞induction後 會快速增長 然後似乎失去adhesion能力 細胞會整片飄起
: 導致後來在每天換medium的時候 一不小心 細胞就整片飄起
: 我應該怎麼改進我的實驗流程?
你的plate是哪一家的,做這種建議非falcon不用
: 現在只想到一開始要induction時的細胞就不要太滿
: seeding細胞後到底要多滿作比較好呢?
我的經驗是要確實滿
seeding直接五分滿(多少細胞叫滿自己去查面積),隔天就當做滿
有些人甚至會長滿多等兩天再induction
為的就是保證contact inhibition/arrest
當然你可以不信,但不妨試試看
你加medium怎麼加?直接加嗎?我是沿壁慢慢加,儘量不直接沖到細胞
這可不比癌細胞
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