Re: [問題] 數細胞的方法??

看板Biotech作者 (哀..煩阿)時間19年前 (2007/03/25 13:05), 編輯推噓4(400)
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※ 引述《LIAR (墮天使)》之銘言: : ※ 引述《boyo (29大頭)》之銘言: : : 你學長不對 只數中間那塊會有不少誤差 : : 這個protocol寫的才是對的 : : 要數這四大塊的原因 是因為你在load cell suspension到counter時 : : 靠近tip的那邊 一定會比較多細胞 另一邊一定會比較少 : : 所以要數這四塊再平均 當然九塊都數是最準 : : 要緊急數細胞時 比方離心完要立即處理 : : 可以數左上 左下 或是右上 右下 : 我覺得還要考慮原本細胞的多寡,數量少的容易有隨機誤差,要多數一些。 : 所以WBC和RBC在計算時就會算不一樣的格子。 : 另外就是loading的量,我一般會loading到30ul,主要是讓medium衝過頭,避免boyo : 說的情況,通常我會建議要把整個面蓋滿,最好再流一些到溝槽中。 : 當然溝槽一定要乾淨啦,而且兩邊最好不要同時算不一樣的。 恩..我說說我的方法 請問大家這樣對不對 我要將細胞種到24well內 1well先加1cc medium 將細胞打下來 離心 離完後倒掉上清液 加入6cc medium 沖散細胞 抽出100ul + trypan blue 400ul 數細胞 數最左上 左下 右下 右上的細胞平均數 計算: 數的細胞*6*10^4/ml=總共細胞數 我要種4*10^4/well 所以每well要放入: 總共細胞數/6000=4*10^4/X X=要從6cc內取的量(ul) 請問這樣對嗎?? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 125.226.81.12

03/25 13:24, , 1F
你少乘了染色時的稀釋倍數,另外dye用量是1:1吧。
03/25 13:24, 1F

03/25 13:43, , 2F
1:1 ? 是指抽出的細胞:trypan blue?
03/25 13:43, 2F

03/25 16:26, , 3F
是的,如果細胞濃的話可以取PBS稀釋但跟DYE比例還是1:1
03/25 16:26, 3F

03/25 17:07, , 4F
恩...因為這也是學長交我的..我其實不知道@@
03/25 17:07, 4F
文章代碼(AID): #161WByNh (Biotech)
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