Re: [問題] 請問lysis buffer和要跑的蛋白有相關嗎？
lysis buffer的目的只是在把細胞弄破讓裡面的protein流出來
還有維持protein的穩定而已
所以要用什麼基本上是要看你想粹取的protein在那個位置
還有這個protein自己本身的特定
來決定lysis buffer的組成
刮刀reuse用酒精噴一下然後擦乾淨就可以了
你也可以拿去用水洗
如果要用清潔劑 記得沖乾淨就好
你學長用的第一種把兩個lysis buffer混在一起
後面那個藍色的應該是loading buffer
測protein concentration的時候 BCA跟Bradford
對於detegent還有一些離子的忍受度不一樣
我猜是因為這個原因 所以才會先測完濃度之後
才把dye放進去
※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
: ※ 引述《LIAR.bbs@ptt.cc (墮天使)》之銘言：
: > 感謝你的回應。
: > 所以通常lysis是只分說要不要跑磷酸化嗎？沒磷酸化就通通RIPA這樣嗎？
: 就我所知 RIPA 用在磷酸化蛋白質上沒有什麼特殊的問題
: 不過也有人說 偵測磷酸化如果碰上問題 可以換用別種 buffer 這方面我就不太了解了
: > 另外請問嚕well時要怎麼知道細胞有破的很完全？會不會有細胞沒破或是根本沒括下來
: > 的情況？
: 有沒有刮下來應該可以用肉眼看
: 或是用顯微鏡看
: 刮下來以後根本沒在怕破不破啦
: 全部拿去煮一煮還有不破的道理？ XD
: > 還有，因為我這邊括刀只有三把，如果reuse的話，要怎麼知道有沒有洗乾淨？肥皂塗
: > 一下沖一下，再用tissue擦乾可以嗎？
: 可以吧 我想不出來那有什麼特別的 甚至未必需要無菌啊
: 不過我都會拿漂白水泡一下 圖個心安
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推
03/18 18:12, , 1F
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