Re: [問題] 關於cloning

看板Biotech作者 ( )時間17年前 (2007/02/11 17:37), 編輯推噓4(402)
留言6則, 4人參與, 最新討論串3/5 (看更多)
※ 引述《philesazumi (苦悶阿)》之銘言: : ※ 引述《Adler (Adler)》之銘言: : : 我想要將一段只有50初b.p.的tag : : 接到一個約5kb的vector上 : : 想要請問一下 有沒有人做過類似的實驗 : : 可以告訴我insert與vector間的molar ratio大概是多少 : : 我已經試過許多比例了...@@ : : 謝謝大家 : 大小太過懸殊,沒有比較容易接, : 而且也不容易跑膠看有沒接上 : 可以先跟小一點(幾百bp)的先接完 : 再接到vector上 : (20~50ng vector x kb size of insert / kb size of vector) x insert:vector : molar ratio (3:1或6:1) = ng of insert : vector的量不用太多,molar ratio這兩個比例一直做得很好,供你參考 我之前做過也是將一段約50 bp的insert接到約5kb的vector上 試了很多不同比例後 覺得約5:1~10:1都可以 但重點是 把所有長出來的clone都挑來做 PCR (數量不會多到上百個) 一定可以找到有ligation的 (我用的是 Invitrogen Zero blunt TOPO cloning kit) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.222.3.155

02/11 18:40, , 1F
colony...株落
02/11 18:40, 1F

02/11 19:07, , 2F
嗯..每個colony可以算是一個single clone吧??
02/11 19:07, 2F

02/11 21:32, , 3F
是single clone沒錯.我用會沒接近去就會自殺的vector.好用
02/11 21:32, 3F

02/11 21:34, , 4F
只要有長的colony就是有接進去的.命中率大約8-9成
02/11 21:34, 4F

02/11 22:23, , 5F
我老闆說要用blue-white,只因為會自殺的他沒做過
02/11 22:23, 5F

02/12 20:39, , 6F
謝謝你~我會再試試看^^
02/12 20:39, 6F
文章代碼(AID): #15pkFpLQ (Biotech)
文章代碼(AID): #15pkFpLQ (Biotech)