※ 引述《philesazumi (苦悶阿)》之銘言:
: ※ 引述《Adler (Adler)》之銘言:
: : 我想要將一段只有50初b.p.的tag
: : 接到一個約5kb的vector上
: : 想要請問一下 有沒有人做過類似的實驗
: : 可以告訴我insert與vector間的molar ratio大概是多少
: : 我已經試過許多比例了...@@
: : 謝謝大家
: 大小太過懸殊,沒有比較容易接,
: 而且也不容易跑膠看有沒接上
: 可以先跟小一點(幾百bp)的先接完
: 再接到vector上
: (20~50ng vector x kb size of insert / kb size of vector) x insert:vector
: molar ratio (3:1或6:1) = ng of insert
: vector的量不用太多,molar ratio這兩個比例一直做得很好,供你參考
我之前做過也是將一段約50 bp的insert接到約5kb的vector上
試了很多不同比例後
覺得約5:1~10:1都可以
但重點是 把所有長出來的clone都挑來做 PCR (數量不會多到上百個)
一定可以找到有ligation的
(我用的是 Invitrogen Zero blunt TOPO cloning kit)
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