[問題] 關於Ni2+ column

看板Biotech作者 (醉心於巴黎)時間17年前 (2007/01/10 01:24), 編輯推噓4(401)
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請問一下 在用imidazole洗純化之蛋白質的時候 因為用1M imidazole去洗還是得不到我要的蛋白質 (用SDS-PAGE沒壓到 但pri-bind有壓到) 所以就再提高imidazole的濃度 當提高到2M時 在洗的過程中 帶有Ni2+的 resin逐漸由綠色轉為紫色 請問是為什麼呢 我再用PBS wash後 又恢復成綠色了 thx! -- 莫聽穿林打葉聲,何妨吟嘯且徐行。 竹杖芒鞋輕勝馬,誰怕?一簑煙雨任平生。 料峭春風吹酒醒,微冷,山頭斜照卻相迎。 回首向來蕭瑟處,歸去,也無風雨也無晴。 ~~~《定風波》~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.230.67.83

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pH?
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沒結合上去吧?通column前後,target protein量有改變嗎?
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用到1M imidazole相當高濃度!
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我只用300mM就可以洗下來了!
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你的cell extracts有表現?
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文章代碼(AID): #15ey-y8G (Biotech)
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