Re: [問題] western blotting
我也有做P-Akt，但sample與你不同。
我說說我的步驟:
1. fresh cell lysate (收sample之後，馬上定量、跑膠)
2. 蛋白質定量後，40-50 ug/lane (小片膠)
3. transfer (semi dry) 15V (30-45min/1 mini gel, 45-60min/2 mini gels)
4. blocking buffer: 5%-milk-in-TBST, 1 hr at room temperature*
5. 1Ab (1:1000) in 5%-milk-in-TBST, 4 degree overnight
6. wash three times by TBST, 10 min each
7. 2Ab (1:1000) in 5%-milk-in-TBST, 1 hr at room temperature*
8. same as step 6
9. ECL 1 min
10.壓片5-15分鐘可見結果
以上* 註記與你實驗中不同之處
p.s. 我的milk的比例很隨意，範圍在3-5%
※ 編輯: paua 來自: 140.129.61.120 (09/23 02:14)
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