[問題] 刮細胞要用cell lysis buffer(RIPA)或PBS就好?

看板Biotech作者 (where to go)時間18年前 (2006/04/27 01:49), 編輯推噓4(4推 0噓 5→)
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刮細胞時是應該加入RIPA(含protease inhibitor)再刮,還是先用PBS刮下來 收集至離心管後,移去上清液,再加入RIPA(含protease inhibitor)? 若先加入PBS來刮細胞,會不會因為尚未加入protease inhibitor於PBS, 使得在刮細胞過程中,因為細胞破裂,導致protease釋出而分解破壞protein? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.113.68.94
推
04/27 02:29, , 1F
PBS須加proteinase inhibitor cocktail 這樣應該回答問題了
04/27 02:29, 1F
推
04/27 08:59, , 2F
理論上刮細胞不太會使細胞破裂或說破的很少
04/27 08:59, 2F
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04/27 09:00, , 3F
所以才能夠刮下來之後離心再用RIPA將細胞打破
04/27 09:00, 3F
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04/27 14:31, , 4F
PBS不一定要加PROTEIN INHIBITOR阿
04/27 14:31, 4F
推
04/27 16:56, , 5F
性的刮細胞方式還是很難避免不會有細胞破裂..我贊成要加
04/27 16:56, 5F
推
04/27 20:28, , 6F
我不了解,PBS用來wash與resuspend,既然後面有個步驟要離去
04/27 20:28, 6F
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04/27 20:30, , 7F
上清液,那破掉的細胞以及released protease也會在這個步驟댠
04/27 20:30, 7F
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04/27 20:31, , 8F
被移走了呀,如果擔心有影響,多用PBS洗一次或動作快一點應該
04/27 20:31, 8F
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04/27 20:32, , 9F
就可以解決了吧?(有些lab是用trypsin收細胞,那不是更危險?)
04/27 20:32, 9F
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