Re: [問題]GST fusion protein的問題

看板Biotech作者churchfire (別小看我...)時間18年前 (2006/04/13 15:22)推噓8(8推 0噓 5→)

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我在做GST-fusion protein的時候我一開始養小量的試IPTG&溫度&時間後來我在試時間的時候，IPGT濃度固定在0.4mM 溫度25度 0、3、6、9小時都收，在跑PAGE的時候其實看不怎麼出來我的蛋白有沒有大量表現我的蛋白(26KD)加上GST(26KD)大約為52KD 反觀GST在26KD的位置都有表現! 同樣的條件去做western 只有3hr的菌有看到微弱fusion protein的band 並有明顯的GST only的band 請問這樣的話要怎麼解決呢?因為我後續要做GST pull down看interaction! 大家有遇過這樣的問題嗎?我的蛋白推測是transcription factor 會不會在產生的過程中，就回去bind在DNA上作用掉了? ---------------------------------------------------------------------- 同樣的我養1L的菌，IPTG 0.4mM 25度 6hr 用GST˙Bind Kits(GST˙bind resin)來純化我的fusion protein 收下來的做western, 同樣是微弱的fusion protein的band 還有很明顯的GST only的band 這樣的話,那我要如何才可以提高我的fusion protein?降低GST protein? 希望各位學長姐可以給我點啟蒙!! 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.82.244

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cloud74115

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churchfire

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