Re: [問題] 有關plasmid
※ 引述《oscarcc (捕捉屬於自己的夢)》之銘言：
: ※ 引述《Aqqqa (沒有暱稱)》之銘言：
: : 這邊該想一個問題
: : 抽取genomic DNA時會不會抽到plasmid?
: : 抽取plasmid DNA時, 那genomic DNA是在哪一步驟去掉的?
: 如果你是用加入solution I, II, III的方法，最後在solutionIII後，
: 會有混濁的渣渣和下面比較澄清的液體，離心之後，渣渣裡面包含菌體的殘骸及
: genomic DNA，而澄清液裡面就含有你要的plasmid DNA
: (主要是利用Solution II裡面的強鹼將DNAdenature, 而Soluion III的醋酸將
: DNA renature)
: : 總不能加DNase吧
: : 抽取plasmid DNA時不能vortex主要是避免genomic DNA被弄斷
: : 這樣會有小片段的形成, 就不能在之前的步驟和蛋白質一起被沉澱去除掉
: : 至於plasmid DNA extraction技術再怎麼好
: : 大多還是三種forms會出現
補充一下
當醋酸快速的renature DNA的時候
因為plasmid DNA的片段小所以可以快速且整齊的黏合回來
而genomic DNA由於片段很大故會有很多鹼基匆忙配對而形成一個大分子
對水的溶解度差而在離心的時候會被沈澱下來
因此而可以將genomic DNA和plasmid DNA分開
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.65.217
討論串 (同標題文章)