Re: [問題] 想請教抽小鼠組織RNA260/280吸光值很低?
這個版大概已經近乎是荒廢狀態了
也不知道發文者問題解決了沒
發文者遇到的問題我認為是在第一步驟就要修正才能解決
你動物組織是新鮮的嗎? 現採現秤?
絕大部分的軟組織都沒有用液態氮冷凍後磨碎的必要
你組織愈新鮮愈好
如果組織被冷凍過 建議要在冷凍狀態就要進Trizol
而且是愈快磨開愈好
另外就是最後一步不需要花這麼多時間去溶
幾十秒就很夠了
樣品應該盡可能維持在低溫狀態
※ 引述《NoahArk (小空)》之銘言：
: 想請教各位大大，最近在使用Trizol抽小鼠RNA，
: 吸光值260/280都在1.3-1.6左右，大部分都在1.3到1.4左右，
: 我抽RNA層的總量抽差不多一半，吸光值260/280還是很低，老師說至少要1.8以上
: 下面是我的操作流程，是不是我抽RNA的過程有錯誤QAQ
: 1. 動物組織秤50mg，先剪成1Ⅹ1 mm2大小面積 在滅過菌的研缽倒液態氮磨碎
: 2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均勻，移至1.5 ml 滅菌過的離心
: 管。
: 3. 樣品在室溫靜置5分鐘。
: 4. 加入200μl氯仿(chloroform)，震盪混勻15秒，室溫靜置15分鐘。
: 5. 以12,000 x g於4 °C離心15分鐘。
: 6. 離心後會分層，小心取上清液至新的滅菌過離心管，RNA在此層。
: 7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol)，pipetting混合均勻。
: 8. 室溫靜置10分鐘，以12,000 x g於4 °C離心10分鐘。
: 9. 使用tip吸取上清液
: 10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol)，震盪混勻樣品。
: 11. 以7,500 x g於4 °C離心5分鐘。
: 12. 使用tip小心吸取酒精後，在laminar flow操作台風乾
: 13. 加入30μl ddH2O 回溶，pipetting 10-15分
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