> ==> yearaaaa@kkcity.com.tw () 的文章中提到:
> ※ 引述《shamtg.bbs@ptt.cc (shan)》之銘言：
> > 想請教各位好心人們
> > 關於 RT-PCR 的一個問題
> > 一般而言進行 RT-PCR 會先轉 RT 後再 PCR
RT-PCR是一個步驟，不是拆開的兩個步驟。
它用RTase做為polymerase，RNA作為template，
產物就是cDNA (complementary DNA)，primer約有四個選擇
1. designed primers 2. oligo d(T) primer 3. random primers
4. RNA degraded primer。
市售的kit就是讓你做到first strand cDNA，接下來要如何應用
cDNA就是你的事了。
請自行思索一下，那麼你接下來的問題就有答案了。
> > 所以會用兩種 primer
> > 那如果是 RT 和 PCR 同時進行(因為他是一套全程的 kit)
> > 可以只用上述的 PCR 專用的 primer 來作全程的實驗嗎?
> 你一開始說的RT-PCR是把mRNA轉cDNA
> 再把cDNA拿去做複製叫做Reverse transcription 再PCR
no....
> 你後述的RT-PCR是指real-time PCR
no....
> 可以用來偵測各種不同組織的mRNA的量
> Primer也是用PCR的primer
> 只是還要再多加一些螢光物
no always.
> 螢光物的卡在DNA上的位置都不同
> 依螢光物的種類而定
> 每種都有人在用
> 大概是這樣子，如果有高手要補充或是糾正的
> 麻煩一下囉^_^
protocol text book例如molecular cloning之類的書是需要的，
如果你想知道原理的話。
paper除非是技術原創者，它不會細說原理。
而text book，如Gene講述的多為研究成果的歸納，也不會有技術的細部解說。
另外不花功夫，以「猜」來湊答案是小學生在做的事，多看書沒壞處，
別望文生義胡亂猜，那對研究沒半點好處。
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* Origin: 中山大學-美麗之島BBS * From: 61.223.71.129
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10/05 16:30, , 1F
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07/16 17:44, , 2F
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