Re: [問題] 我的電泳結果沒有亮帶 - 步驟
※ 引述《ndmcls (季勗)》之銘言：
: ※ 引述《wulito (考完悶的緊)》之銘言：
: : 取菌液 1 c.c.
: : 以 10000 xg 離心5分鐘
: : 取沉澱 改加入 200ul 無菌水
: : 煮沸 10mins 以 10000 xg 離心 5 mins
: : 取上清液後
: : 取 2ul 跑 PCR
: 如果你只是要測試一下有沒有 plasmid, 那還不如直接用 single colony
: 取一點來跑 pcr.
: 其實最好的辦法是先把 plasmid 抽出來(現在 kit 那麼多, 不然自己配
: 也行), 先看看你到底有沒有真的把 dna 轉進去.
如果只是要粗略鑑定,因為ＫＩＴ也是很貴的.......
可以用quick check 的方式,方法可以自行到網站找
大略方法如下
挑single colony,養在1ml中,過三四個小時（看得見沙沙的就可以）
取50～100出來,離心並去除上清液
再加30ul的水重新懸浮
然後再加30ul的phenol/chloroform
shake+ 13000RPM離心
最後取上清液5~10ul去跑ＤＮＡ gel
不用load marker,但要加control組一起跑 （第一次玩，可以加control的colony
一起處理,再加外laod一組是純化的DNA看看）
如果有insert，應該會看到up- shift
除非你的size很小，不然跑1.2﹪的gel就很適合了
: : 之後以 95度 5 mins 1 cycle
: : 95度 30 sec
: : 55度 1 mins
: : 72度 30 sec 35 cycle
: 人家也問了, 你的 insert 有多長? 沒有一個 pcr program 跑天下的.
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