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作者 mattmatt 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共275則

限定看板：Biotech

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[求救] real time PCR 不穩定的結果

[ Biotech ]14 留言, 推噓總分: +5

作者: delta1005 - 發表於 2010/10/24 20:05(15年前)

10^F推mattmatt:總cycle數40嗎? 通常cycle數落在30以後線性會比較差10/25 01:13

11^F→mattmatt:若你的target比較少 40cy可能不夠偵測增加10cycle看看10/25 01:14

12^F→mattmatt:或是增加template量 35才出來的話可能要增加100倍濃度...10/25 01:16

13^F→mattmatt:& 除非sample很珍貴建議還是不同組分開做比較好10/25 01:18

14^F→mattmatt:也有可能pcr條建不適合target那組primer/probe..原因很多10/25 01:23

Re: [求救] plate倒放的原因?

[ Biotech ]7 留言, 推噓總分: +4

作者: mattmatt - 發表於 2010/10/23 16:36(15年前)

5^F→mattmatt:原po是說鋼珠...但我們家也是用玻璃珠..10/24 02:06

[求救] 長片段ligation>"<

[ Biotech ]39 留言, 推噓總分: +8

作者: windyflyer - 發表於 2010/10/21 13:29(15年前)

17^F推mattmatt:我想CIAP還是要做換Antarctic phosphatase比較好用10/23 16:58

18^F→mattmatt:ligation insert給他加到破表(10:1) 溫度4度20小時以上10/23 16:59

19^F→mattmatt:vector的話大概總量150ng就夠了...10/23 17:00

37^F推mattmatt:↑negative control嗎? nc長太多要check cip反應喔=.=b10/29 23:35

38^F→mattmatt:重點是實驗組有長嗎....?10/29 23:35

[求救] 身體被UV燈照到

[ Biotech ]20 留言, 推噓總分: +10

作者: david6602ok - 發表於 2010/10/19 00:15(15年前)

17^F推mattmatt:除了眼睛皮比較薄容易受傷以外皮膚都很厚拉10/23 16:51

18^F→mattmatt:可以保護還會自我修復頂多脫皮而已跟曬傷不多10/23 16:52

19^F→mattmatt:109辣妹全身都去照幾個小時 5分鐘沒事啦10/23 16:53

[求救] RT-PCR的一些小細節

[ Biotech ]13 留言, 推噓總分: +6

作者: cmublue - 發表於 2010/10/17 15:42(15年前)

9^F推mattmatt:google: semi quantitative (RT)-pcr 或半定量10/18 01:26

[求救] 請幫我比較一些冷門的pipetman品牌

[ Biotech ]28 留言, 推噓總分: +15

作者: darxky - 發表於 2010/10/13 23:01(15年前)

17^F推mattmatt:thermo不錯在美國是大廠台灣近幾年才進他的pipetmen10/15 01:59

18^F→mattmatt:手感很輕操作也滿輕鬆的頗好按還有抗菌或可滅菌等等..10/15 02:00

19^F→mattmatt:不過Gilson現在也改成省力型也很輕很好按大家可以試試10/15 02:01

[求救] 請問養菌的問題

[ Biotech ]20 留言, 推噓總分: +9

作者: darxky - 發表於 2010/10/11 23:28(15年前)

20^F推mattmatt:這篇討論到最後快變成超小型發酵槽了XD10/15 02:03

[求救] 如何找gene的promoter(gene前的sequence)

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +6

作者: tomoyo09 - 發表於 2010/10/04 19:45(15年前)

3^F推mattmatt:你的材料是甚麼物種?10/05 14:48

[求救] 關於養細胞的汙染

[ Biotech ]42 留言, 推噓總分: +7

作者: conan11 - 發表於 2010/09/26 18:47(15年前)

8^F推mattmatt:看抗生素的種類和量囉...抗生素也是會消耗的~09/27 00:44

9^F→mattmatt:器皿/medium或操作汙染還有機會避免..最怕是stock有問題~09/27 00:45

[求救] 請幫我檢視抽RNA的流程!

[ Biotech ]66 留言, 推噓總分: +11

作者: sunday30430 - 發表於 2010/09/11 16:05(15年前)

34^F推mattmatt:lysozyme真的處理有點久..破菌後RNase就放出來了09/12 03:45

35^F→mattmatt:RNA 15分鐘就會被吃光.試試別的破菌法? 超音波.冷凍解凍.09/12 03:46

36^F→mattmatt:另外kit多少會有dna殘留原核的話還是dnase一下比較保險09/12 03:50

37^F→mattmatt:Dnase inactive建議用PCI/CI 65度C下Rnase活性會出來09/12 03:52

38^F→mattmatt:你說dnase完RT還會有band 這有點怪...dnase是哪一牌的阿?09/12 03:57

39^F→mattmatt:最後RT完沒有band...這原因就很多了..09/12 03:58

40^F→mattmatt:不知有沒有RNA抽完直接跑膠的圖可以看一下?09/12 03:59

49^F推mattmatt:一般用kit或傳統方法甚至trizol純化多少會有rnase殘留09/12 19:22

50^F→mattmatt:這應該大家都可認同,在dnase處理時會加rnase inhibitor09/12 19:23

51^F→mattmatt:這種情況在37度反應下 rnase活性似乎沒有這麼高09/12 19:24

52^F→mattmatt:但在65度下 rnase活性似乎會很強 (不知道是哪隻rnase)09/12 19:24

53^F→mattmatt:之前做測試不管是否加入dnase或dnase inhibit solution09/12 19:26

54^F→mattmatt:RNA都會嚴重degrade 但手上沒有"真正純"的RNA09/12 19:27

55^F→mattmatt:所以很難證明究竟是RNase在65度下活性大增09/12 19:27

56^F→mattmatt:還是說RNA在65度下會degreade (已排除dnase或buffer汙染)09/12 19:28

57^F→mattmatt:RT時也有一步將RNA加熱至65度姑且相信65度不會使RNA分解09/12 19:30

58^F→mattmatt:只能推測RNase於65度活性增強(印象有看過國外討論有提到)09/12 19:31

59^F推mattmatt:最後還是用PCI/CI 管他有RNase DNase 一次清光光就沒問題09/12 19:34

60^F→mattmatt:另外從此之後抽RNA都沒刻意放在冰上一般室溫操作都沒事09/12 19:34

61^F→mattmatt:經過純化後在室溫下 RNase活性沒有想像中的強 so...09/12 19:37

62^F→mattmatt:上面這句違反正道...為求保險好孩子不要學XD09/12 19:38

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