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作者 mattmatt 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共275則

限定看板：Biotech

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[求救] 抽plasmid之後的sample確認我的電泳爆 …

[ Biotech ]22 留言, 推噓總分: +12

作者: Drabbit - 發表於 2011/09/19 17:09(14年前)

20^F推mattmatt:1.load太多 2.plasmid二級結構09/24 05:37

21^F→mattmatt:另外你列出的條件都只有體積沒有濃度這樣並不是很嚴謹..09/24 05:39

22^F→mattmatt:建議你做實驗都以"濃度"為準則可以避免很多不必要的麻煩09/24 05:40

[求救] ELISA二抗跟著一抗跑?!

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +2

作者: someone666 - 發表於 2011/09/07 14:33(14年前)

4^F推mattmatt:blocking方法很多, milk, BSA, gelatin都是常用的09/09 03:34

5^F→mattmatt:簡單一點就試試不同的blocking reagent 拉長blocking時間09/09 03:36

6^F→mattmatt:增加二抗稀釋倍數,縮短二抗反應時間,wash次數&強度增加等09/09 03:37

7^F推mattmatt:麻煩就是換抗體或是換盤子了有可能你的抗體去跟誰反應了09/09 03:40

[求救] Cloning

[ Biotech ]26 留言, 推噓總分: +6

作者: alicialai - 發表於 2011/04/18 07:35(14年前)

18^F推mattmatt:colony長在plate上和菌懸浮在LB裡面抗生素實際作用濃度04/19 07:15

19^F→mattmatt:會有落差液態裡面菌體分散抗生素很容易抑制"每一個"菌04/19 07:16

20^F→mattmatt:菌體來不及生產兩種抗抗生素就會被殺死04/19 07:17

21^F→mattmatt:建議你plate上先用兩種抗生素篩選挑出single colony後04/19 07:18

22^F→mattmatt:液態用你接進去的抗生素(Tet)一種就好04/19 07:19

23^F→mattmatt:液態用兩種的話濃度都減半不然菌會長得很慢甚至不長04/19 07:21

[求救] real-time qPCR

[ Biotech ]26 留言, 推噓總分: +4

作者: whyneeds - 發表於 2011/04/17 18:40(14年前)

1^F推mattmatt:不懂檢量線低濃度是甚麼意思? 另外total cycle數是多少?04/17 21:59

3^F推mattmatt:可能要看過raw data才能確認是甚麼狀況04/17 22:57

4^F→mattmatt:但我個人覺得 NTC與低濃度跑出來的35-36的數值04/17 22:58

5^F→mattmatt:曲線又沒有好的斜率有可能是primer dimer自己放大的產物04/17 22:59

6^F→mattmatt:或是probe與primer之間的反應04/17 23:00

9^F推mattmatt:而不是真正target造成的訊號04/17 23:04

10^F→mattmatt:不知你有沒有跑melting curve的圖也許可以參考04/17 23:04

11^F→mattmatt:另外濃度低到0.01fg可以說是超過real time PCR的極限了04/17 23:06

12^F→mattmatt:primer&probe找不到目標就跟NTC一樣結果04/17 23:07

13^F→mattmatt:然後primer & probe自己亂搞了起來04/17 23:07

16^F→mattmatt:若老板可接受primer dimer訊號的話這個結果算是正常現象04/17 23:09

17^F→mattmatt:若不接受的話就考慮換primer & probe了04/17 23:09

19^F→mattmatt:還是有機會有有可能是primer dimer產物先被放大04/17 23:11

20^F→mattmatt:好死不死probe剛好會去hybrid到到後面幾輪訊號就出現了04/17 23:11

22^F推mattmatt:請問是Roche Lightcycler 毛細管機型嗎....?04/17 23:14

[求救] Vector NTI如何新增新的RE site?

[ Biotech ]3 留言, 推噓總分: 0

作者: leoblack - 發表於 2011/04/17 11:52(14年前)

1^F→mattmatt:啟動local database 選enzyme 點上面新增輸入名稱04/17 22:01

2^F→mattmatt:辨識序列以及切點切點要輸入數字:切在第幾個base04/17 22:02

[求救] 硫酸銨沉澱中蛋白質回收的問題

[ Biotech ]10 留言, 推噓總分: +2

作者: chong - 發表於 2011/04/16 11:24(14年前)

4^F推mattmatt:我們實驗室也是JTBacker的粗顆粒硫酸銨04/17 22:06

5^F→mattmatt:因為收全蛋白所以直接把秤好的硫酸銨一次加下去04/17 22:07

6^F→mattmatt:4度c攪拌overnight 讓他全部融解並達到動態平衡04/17 22:07

7^F→mattmatt:顆粒比較粗溶解的也比較慢收起蛋白都OK04/17 22:08

8^F→mattmatt:同Anvec 不知你們收完有沒有用通column的buffer做透析?04/17 22:10

[討論] real-time PCR SYBR Green supermix

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +2

作者: shenhsu - 發表於 2011/04/15 17:02(14年前)

9^F推mattmatt:kapa04/17 01:23

[求救] real-time PCR結果分析上的疑惑

[ Biotech ]10 留言, 推噓總分: +3

作者: shenhsu - 發表於 2011/03/24 23:59(14年前)

2^F推mattmatt:嚴格點的話你需要分析顯著性.才能下結論03/25 00:53

3^F→mattmatt:但第一點有可能是genomic DNA殘留或是basal level表現量03/25 00:54

4^F→mattmatt:你的基因有好幾百倍的話一定有顯著性03/25 00:54

5^F→mattmatt:第二點不曉得你的40%是相對表現量? 絕對量? Ct值?03/25 00:55

6^F→mattmatt:但如果表現量真的只有兩三倍的差異真的就不太顯著03/25 00:57

7^F→mattmatt:你也需該考慮sample的處理上是否真的造成顯著差異03/25 00:58

8^F→mattmatt:另外其實很難說一個基因"完全"不表現也許只是很低03/25 00:59

9^F→mattmatt:所以才會另外找internal control來做標準化並比較03/25 01:00

[求救] real time PCR上機的前處理步驟

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +3

作者: allisa - 發表於 2011/03/24 16:41(14年前)

3^F推mattmatt:2&3都可以個人覺得先轉好cDNA之後會比較輕鬆03/24 23:30

[問題] 超微量分光光度計的操作與維護

[ Biotech ]19 留言, 推噓總分: +7

作者: sabulo - 發表於 2011/01/27 23:00(15年前)

2^F推mattmatt:我們家的也只拿來測核酸廠商是說蛋白比核酸有機會黏住01/28 05:49

3^F→mattmatt:已經用了三四年耗材只有拭鏡紙每月用量可能超過500次01/28 05:51

4^F→mattmatt:目前定量還算準確純化後的核酸定都滿準的01/28 05:53

5^F→mattmatt:LED光源就是波長固定沒法定全波長但只定核酸應該也ok01/28 05:55

6^F→mattmatt:電動馬達和電磁鐵設計不同而已不太影響廠商勤快點才是01/28 05:57

7^F→mattmatt:至於連續測 sample-sample之間會不會汙染的問題01/28 05:58

8^F→mattmatt:我們都會用ddH2O當成control 測完一個sample 擦拭乾淨01/28 05:59

9^F→mattmatt:再測ddH2O 結果都還滿乾淨的不會有sample殘留問題01/28 06:00

10^F→mattmatt:蛋白就容易有殘留的可能可能要頻估一下要不要測蛋白01/28 06:01

11^F→mattmatt:校正的話廠商一年大概來看一次沒甚麼特別問題也沒校正01/28 06:03

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