hplc問題

看板Chemistry作者 (4funnnnn)時間1年前 (2022/05/27 03:51), 1年前編輯推噓6(6推 0噓 31→)
留言37則, 5人參與, 1年前最新討論串1/1
各位好～ 最近在實驗室收數據的時候產生一個hplc問題,現在很茫然，還請各位大神幫忙解惑，提供我 一些想法～拜託拜託 首先我原本條件都是ADH 但針對這化合物我打了300分鐘，(ipa:hex= 15:85)圖超過兩百分鐘出來，然後還雜到，我就 決定換管柱了 後來IA(ipa:hex = 30:70) https://i.imgur.com/b9FjKDF.jpg
所以我又試了流速降到0.3 圖如下 https://i.imgur.com/Vm5A228.jpg
後來降極性（ipa:hex=15:85)，變這樣超級醜 https://i.imgur.com/wmy26YW.jpg
後來又跟學長討論換溶劑系統，圖怎麼跑都很醜（旁邊單位是微伏特，所以其實peak很小） （EtOH:hex=15:85) https://i.imgur.com/7kuL1Tw.jpg
然後我又試了IB 跟IG 打一百分鐘都沒有東西（哭～） 想問問看有人可以給我一點建議嗎～拜託拜託 先謝謝大家了，畢業也靠大家了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 220.136.213.181 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Chemistry/M.1653594710.A.DCF.html
推
05/27 07:45, 1年前 , 1F
你的化合物是什麼類型? 而且ADH和IA用的是類似的固定相，你
05/27 07:45, 1F
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05/27 07:45, 1年前 , 2F
用一樣的溶劑系統自然會看到類似的結果啊
05/27 07:45, 2F
m 我用IA ADH IB IG 都試過換系統也試了，換系統訊號出不來，不知道為何= = [1;31m→ tony15899: 我看不懂你要問什麼 是分離很差還是進樣後沒有peak 05/27 09:56
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05/27 09:57, 1年前 , 3F
而且你可以用梯度流洗 除非偵測器是RI
05/27 09:57, 3F
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05/27 10:03, 1年前 , 4F
而且最後一張圖不算醜了 只是流洗強度有點太強
05/27 10:03, 4F
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05/27 10:04, 1年前 , 5F
還有時間超過1小時的條件你可以不用試了
05/27 10:04, 5F
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05/27 10:06, 1年前 , 6F
沒特殊需求拉長分析時間只會拖累你實驗時間
05/27 10:06, 6F
我就是因為時間拉太長我才換column但怎麼換都沒有理想的結果，我用的HPLC設定方法只能設一種，不過梯度好像也是可行的方法我會再想辦法試試看~感謝tony大建議，我換column就是因為訊號出不來，其他目前的大問題是訊號分不開，最後一張圖訊號只有5mV，所以是超級小的~ ※ 編輯: hhuurraayy (220.136.213.181 臺灣), 05/27/2022 15:09:12 ※ 編輯: hhuurraayy (220.136.213.181 臺灣), 05/27/2022 15:21:11
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05/27 19:40, 1年前 , 7F
如果沒訊號 把管柱拆掉換連接管去跑看有沒有訊號出來
05/27 19:40, 7F
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05/27 19:41, 1年前 , 8F
假設進樣正常的話偵測器訊號瞬間會出現一根
05/27 19:41, 8F
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05/27 19:42, 1年前 , 9F
如果還是沒有訊號 1.你樣品瓶鎖太緊取樣時變真空吸不到
05/27 19:42, 9F
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05/27 19:44, 1年前 , 10F
2. 檢查自動進樣或手動進樣設備，或是檢查樣品配製濃度
05/27 19:44, 10F
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05/27 22:36, 1年前 , 11F
就只有換IB有這個狀況其他都沒有~謝謝tony 大
05/27 22:36, 11F
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05/27 22:36, 1年前 , 12F
我明天會用梯度看看
05/27 22:36, 12F
推
05/28 07:46, 1年前 , 13F
有AD column 嗎
05/28 07:46, 13F
沒有哈哈
推
05/28 17:21, 1年前 , 14F
設梯度看看
05/28 17:21, 14F
推
05/28 17:27, 1年前 , 15F
表示你這兩個東西在這個極性下貼很近 然後我記得想要p
05/28 17:27, 15F
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05/28 17:27, 1年前 , 16F
eak比較不拖應該是要升流速 降流速峰寬變大更容易黏在
05/28 17:27, 16F
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05/28 17:27, 1年前 , 17F
一起 然後看起來他在EtOH系統狀況不好
05/28 17:27, 17F
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05/28 17:27, 1年前 , 18F
還是維持原系統然後溶劑比例從固定改成配兩瓶用混合拉
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05/28 17:27, 1年前 , 19F
梯度方式試看看 再去抓梯度條件
05/28 17:27, 19F
感謝建議，我昨天想說用IA 0.1硬沖，有分開了，但時間要兩百分鐘，流速一大概三十分鐘就出來了，我得想法是先75/25十分鐘，再換成70/30流速0.3，不知blue大覺得如何，我沒試過梯度，所以也沒什麼方向，想說先試試 ※ 編輯: hhuurraayy (140.122.57.38 臺灣), 05/29/2022 17:42:35
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05/29 23:20, 1年前 , 20F
如果管柱是 250 * 4.6 mm 5μm, 基本的流速就是1mL/min
05/29 23:20, 20F
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05/29 23:24, 1年前 , 21F
這個流速1一般是不會優先去變動的 都是動溶劑比例
05/29 23:24, 21F
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05/29 23:27, 1年前 , 22F
除非你用的溶劑會導致系統壓力過高 例如純IPA
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05/29 23:28, 1年前 , 23F
等梯度能在短時間出來大概就不用改梯度跑了 省去再平衡
05/29 23:28, 23F
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05/29 23:30, 1年前 , 24F
只是要注意每次打完樣品要記得用適當強度溶劑洗管柱
05/29 23:30, 24F
好的，我會再試試~~感謝建議!!!!
推
05/31 11:28, 1年前 , 25F
先看管柱的說明書建議流速 上面應該會有管柱尺寸的建
05/31 11:28, 25F
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05/31 11:28, 1年前 , 26F
議流速還有他的QC用的溶劑比例之類的
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05/31 11:28, 1年前 , 27F
然後RT時間 因為是正向所以比例可以拉高極性看看 能不
05/31 11:28, 27F
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05/31 11:28, 1年前 , 28F
能得到更好的peak集中性跟分離率 但還是要看整體壓力
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05/31 11:28, 1年前 , 29F
不過要確定你的樣品提高極性不會析出 如果會可能會塞
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05/31 11:28, 1年前 , 30F
管柱
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05/31 11:31, 1年前 , 31F
有原條件的圖嗎 這樣才能比較原管柱跟改IAIA管柱的差
05/31 11:31, 31F
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05/31 11:31, 1年前 , 32F
異 不過如果你兩隻管柱的參數差不多 那他的分離效果差
05/31 11:31, 32F
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05/31 11:31, 1年前 , 33F
異不會太多
05/31 11:31, 33F
推
05/31 11:39, 1年前 , 34F
你最後ipa 換成EtOH 等於整體極性上升 雖然訊號很小但
05/31 11:39, 34F
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05/31 11:39, 1年前 , 35F
看圖確實分離率跟RT時間有改善 如果管柱耐受可以 換回
05/31 11:39, 35F
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05/31 11:39, 1年前 , 36F
ADH 跟原本的移動相 然後把極性比例調高看看 不知道50
05/31 11:39, 36F
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05/31 11:39, 1年前 , 37F
/50有沒有辦法就是了
05/31 11:39, 37F
管柱耐受度不高，所以我把流速調慢，後來再試一次EtOH對我的化合物太強了，流速0.1來是雜，但我會再試試其他方法~~謝謝B大!!!! ※ 編輯: hhuurraayy (220.136.187.131 臺灣), 05/31/2022 15:21:58
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