[實驗] HPLC VS TLC HPLC無法分離

看板Chemistry作者 (...)時間10年前 (2013/08/07 08:56), 編輯推噓7(7推 0噓 23→)
留言30則, 8人參與, 最新討論串1/1
有關HPLC實驗問題 在做一有機化合物分離 肉眼看顏色很明顯有兩種不同 sample為中性 溶於THF 微溶MeOH TLC Plate用的是Silica Gel 以THF:MeOH=1:4去跑則分成兩點 但是用HPLC去跑C18 column THF:MeOH=1:4 不管流速快慢0.1~1ml/min 還是改變溶劑比例 在HPLC都只有一根PEAK 無法分離 懇請高手幫助 -- 雖然我們不再像以往以前一樣有力 以非往昔可以驚天動地 但我們能仍然是自己 英雄的情懷與雄心 隨著時間與命運而薄弱 但意志仍舊堅定 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.219.129.193 ※ 編輯: hadessage 來自: 61.219.129.193 (08/07 10:25)
推
08/07 14:12, , 1F
你TLC 是 coating C18的嗎?
08/07 14:12, 1F
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08/07 14:13, , 2F
跑HPLC 跑多久?
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08/07 16:28, , 3F
TLC Plate用的是Silica Gel
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08/07 16:29, , 4F
HPLC跑到60min 都是一根 手邊也沒有c18的TLC片
08/07 16:29, 4F
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08/07 16:29, , 5F
這樣有辦法判別嗎?
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08/07 17:28, , 6F
C18很早就沖出來的話可能強度太強 逐步調低看看
08/07 17:28, 6F
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08/07 17:30, , 7F
畢竟你用的是全有機相
08/07 17:30, 7F
THF:MeOH = 20:80 流速0.5ml/min 約在10min跑出 THF:MeOH = 5:95 流速0.3ml/min 約在40min跑出 可是還是通通只有一根 完全無法分離另一個點 ※ 編輯: hadessage 來自: 114.32.189.177 (08/07 18:11)
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08/07 18:55, , 8F
UV波長?
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08/07 19:07, , 9F
254nm
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08/07 19:07, , 10F
210~800 怎麼掃都只有一根
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08/07 19:52, , 11F
跑完片後各別刮下來回溶再打HPLC呢?
08/07 19:52, 11F
推
08/07 22:28, , 12F
可以跑梯度看看..
08/07 22:28, 12F
感謝chrisyuu大 和 cuddi大 明天來試看看這些招術 ※ 編輯: hadessage 來自: 114.32.189.177 (08/07 23:09)
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08/08 20:56, , 13F
還是改用Si60 column分比較快
08/08 20:56, 13F
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08/08 20:57, , 14F
但是tlc分的開 直接流支column應該也分的開吧~
08/08 20:57, 14F
推
08/09 13:24, , 15F
他用silica gel TLC分，但是C18 column跑，這樣條件分，
08/09 13:24, 15F
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08/09 13:24, , 16F
能不適合他的C18 條件
08/09 13:24, 16F
後來還是是不出來 最後跑COLUMN分離出另一點 在單做HPLC打點看看 結果是強度太低根本看不清楚的點 可是在TLC上明明很清楚啊 ※ 編輯: hadessage 來自: 61.219.129.193 (08/09 15:16)
推
08/09 21:51, , 17F
因為你用SILICA TLC 找條件 不是C18 -silica ，所以會有
08/09 21:51, 17F
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08/09 21:52, , 18F
些差異
08/09 21:52, 18F
推
08/11 16:22, , 19F
那就別再用THF跟MeOH跑C18 因為你在怎麼分 只有出來時間不同
08/11 16:22, 19F
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08/11 16:22, , 20F
不會因為比例不同 而可以分離出來 再找新條件吧
08/11 16:22, 20F
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08/11 16:23, , 21F
而且 HPLC 級的 THF 也不便宜吧XD
08/11 16:23, 21F
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08/11 16:26, , 22F
C18 有C18的條件 silica 有 silica的條件 正常都不太能互用
08/11 16:26, 22F
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08/11 16:30, , 23F
我用silica gel有純化出一個結晶 但 點片 長短波 沒吸收
08/11 16:30, 23F
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08/11 16:30, , 24F
HPLC用了很多條件 也分不出來 但 燒片 卻出來了 很妙吧
08/11 16:30, 24F
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08/11 16:31, , 25F
而且HPLC 沒訊號喔 ^.<
08/11 16:31, 25F
推
08/11 19:58, , 26F
可以用極性低些的mobile phase 試試..有可能是compound
08/11 19:58, 26F
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08/11 19:59, , 27F
卡在column內沒出來.如果肉眼都看的到..detector應該看
08/11 19:59, 27F
推
08/11 20:03, , 28F
的到.不然還有種可能..曾經有人應該HPLC的管子是金屬材
08/11 20:03, 28F
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08/11 20:05, , 29F
質..而吸附在管內面...不過這個機率應該很低很低....
08/11 20:05, 29F
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08/12 22:11, , 30F
感謝大家提供方法
08/12 22:11, 30F
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