普生共筆訂正及解釋!!! 20-1 ~~
真是對不住.共筆解釋太少.請大家參照以下內容應該就能體會了
進一步解釋 20-1 基因轉殖流程
~名詞解釋~
1.Transformation:(轉形作用)
2.Ristriction site:限制位.為限制酵素切割之處(以課本例子即為lac Z基因所在處)
3.核酸雜合反應=核酸探針配對於所需DNA(DNA of interest)的過程
4.菌落雜合術=核酸雜合反應+標幟法(放射性同位素或螢光標籤)
5. 人造酵母染色體(YACs):
較進步的重組 DNA 技術中，酵母菌乃是一種很重要的寄主生物，可用質體
DNA 為媒介物，引入外來DNA 而表現之(做出YACs)
含有酵母菌端粒(telomeres)可提供複製的YACs在細胞分裂時分配給子細胞
YAC於每個臂上亦含有一個篩選標記(TRP1和URA3)以及一些限制部位供DNA插入序列
YACs可接受比1 Mb更長之DNA插入序列
流程詳述:
首先.以限制酵素切割質體及所用真核DNA分子.DNA分子會被切割成許多小段.每段兩末
端的DNA序列皆相同.但每段中間的序列可能不同.
這些小段與質體(必含有抗抗生素基因)混合.而形成的各個不同的質體統稱為基因體庫.
此基因體庫分三種質體:
A. 沒接到真核DNA片段的(lac-Z gene仍在.可產生分解X-gal試劑的酵素) 呈藍色
B. 有接到真核DNA片段.但不含所需基因
C. 有接到真核DNA片段.且其中也包含所需DNA基因
接著.以X-gal試劑篩選A.B.C三者.僅A菌落會呈現藍色.B.C皆呈現白色.而B+C=基因體庫
(genomic library).
再來.以核酸探針為工具的菌落雜合術篩選出帶有所需dna的菌落.即大功告成.
另外.基因探針即是c-DNA的一種~~
大家加油~~~
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