[求救] 放大現有cDNA library

看板Biotech作者 (JBY)時間8月前 (2023/09/04 11:50), 編輯推噓3(3推 0噓 21→)
留言24則, 6人參與, 8月前最新討論串1/1
最近要做一個實驗，需要購買comercial human cDNA library進行gene放大的實驗， 因為需要放大的gene非常多（有快要200組的primer要做）， 一般買來的cDNA library大多只能做20 ~ 40 reaction，還要考慮失敗的問題， 由於cDNA library真的很貴，要多買幾管的話會非常花錢， 請問是否有可能用PCR的方法先將library放大，且仍保留library的diversity呢？ 雖然知道從RNA反轉成cDNA的方法，但是不知道是否可以用在放大cDNA上... 非常感謝！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.216.91.60 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1693799453.A.718.html
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09/04 22:09, 8月前 , 1F
這library不是在vector上嗎？
09/04 22:09, 1F
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09/05 08:12, 8月前 , 2F
看DATASHEET是RT轉完的產物，不是在Vector裡的樣子...y
09/05 08:12, 2F
推
09/05 10:34, 8月前 , 3F
小心實驗結果會失真。你們論文上也不能省掉這一步沒寫。
09/05 10:34, 3F
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09/05 10:55, 8月前 , 4F
是否能考慮適量稀釋原液？
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09/05 11:02, 8月前 , 5F
cDNA pool如果不是接在vector就稱做library有點怪,純粹RT
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09/05 11:06, 8月前 , 6F
就是cDNA,如同一般不會說拿cDNA library做qPCR看表現量
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09/05 11:09, 8月前 , 7F
不知道你的目的,如果是要拿到full-length clone,稀釋跟自
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09/05 11:09, 8月前 , 8F
行放大都不是好辦法
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09/05 11:12, 8月前 , 9F
原來如此...我們現在可能會再去找看看是否有直接接在
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09/05 11:13, 8月前 , 10F
vector裡可自行放大的library...
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09/05 11:13, 8月前 , 11F
我們是要從這library裡拿到full-length clone的
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09/05 11:13, 8月前 , 12F
就這個狀況我會multi-plex,或真的花錢買大量的折扣
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09/05 11:18, 8月前 , 13F
感謝樓上，我再研究看看並跟老闆討論是要用那種方案...
09/05 11:18, 13F
推
09/05 18:39, 8月前 , 14F
好奇為什麼不從RNA開始？
09/05 18:39, 14F
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09/05 21:02, 8月前 , 15F
RNA樣本哪來啊XDDD 人類的耶XD
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09/06 12:19, 8月前 , 16F
抽血.醫院檢體？
09/06 12:19, 16F
推
09/06 14:44, 8月前 , 17F
如果是RT產物 5' ssDNA linker ligation -> polyT PCR
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09/06 14:44, 8月前 , 18F
?
09/06 14:44, 18F
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09/06 22:07, 8月前 , 19F
我猜原po的應該只是tissue-specific cDNAs,就像下面這種,
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09/06 22:07, 8月前 , 20F
ScienCell Research Laboratories #1104
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09/06 22:07, 8月前 , 21F
Human Brain Vascular Smooth Muscle Cell cDNA
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09/06 22:08, 8月前 , 22F
才會覺得只有20~40 reaction可用
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09/06 22:09, 8月前 , 23F
library應該像Human Embryonic Stem Cell Primary cDNA
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09/06 22:11, 8月前 , 24F
Library, XpressBio #12260-P這種vector形式的,可用上千次
09/06 22:11, 24F
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