[求救] Western blot訊號破碎問題請益

看板Biotech作者 (打我ㄚ笨蛋)時間1年前 (2023/04/28 10:41), 編輯推噓5(5推 0噓 10→)
留言15則, 8人參與, 1年前最新討論串1/1
各位前輩先進大家好 我跑完Western後用ponceau S染色後發現蛋白無法順利的轉印到PVDF上 像是卡了很多小氣泡的感覺 如下圖 https://i.imgur.com/TOfchPe.jpg
最後呈色時那些轉印不完全的區域訊號就會變得破碎 希望有前輩能幫我解決這個問題 謝謝!! SDS-PAEG電泳條件：70v, 2 hr 20 min 轉漬條件：100v, 1.5 hr, 電流0.2A~0.3A protein 10 ug -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.10.5.84 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1682649706.A.889.html
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就….泡泡啊，filter paper、PVDF和gel這三者之間有氣
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泡，有些很小的氣泡在組裝的時候可能看不到，但是一通
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電，溫度升高氣體溶解度降低加上體積膨脹就出現了，有
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加SDS會更嚴重，尤其你用100 V，轉完應該很熱吧？
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同意樓上，這就是你疊三明治時的氣泡沒趕掉，這圖應該是是g
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el跟PVDF之間的氣泡的影響，請在疊三明治時多看幾眼，或請
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學長姐幫忙檢查
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推
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中間氣泡沒弄掉啊
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推
04/28 13:44, 1年前 , 9F
先去練桿蔥油餅
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推
04/29 23:53, 1年前 , 10F
有泡泡啦 滾輪多滾幾次 同一方向滾
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推
04/30 16:32, 1年前 , 11F
以上 還有疊起來進tank灌buffer後整個tank往桌上平平
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拍 拍到沒有氣泡再從sandwich跑出來
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05/01 01:16, 1年前 , 13F
我個人不推薦用桿的就是了，有些 gel 桿一桿會變形
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推
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如果是PVDF, 甲醇活化後先用fresh trans buffer rins
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05/09 17:44, 1年前 , 15F
e一下，轉個幾分鐘，可以降低小氣泡產生。
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