[求救] 如何得知plasmid有被抽成功？？

看板Biotech作者 (Inequality_c)時間2年前 (2021/11/09 10:18), 編輯推噓7(7推 0噓 19→)
留言26則, 8人參與, 2年前最新討論串1/1
各位大大好，小妹是小研究生一枚 上研究所後發現自己的能力實在太不足夠（只能努力學習） 但實驗室學長姐真的太恐怖 只好上來求救 想請問各位大大： Q:我要如何知道我抽的plasmid有沒有成功? 我的老闆告訴我去跑膠，然後順便一欄跑Genomic DNA 一欄跑plasmid DNA 順便測試條件看看後續實驗的條件要用多少濃度來跑 可是沒有跑PCR的狀態下，沒有用primers去夾會有產物嗎？ 還是我要ligation過才可以去跑?? 謝謝大家 不好意思可能問了一個白痴問題 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.219.218.127 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1636424280.A.FEB.html
推
11/09 12:53, 2年前 , 1F
去看addgene的plasmid 101系列
11/09 12:53, 1F
推
11/09 14:21, 2年前 , 2F
當然會有產物 Plasmid依然是核酸 當然跑膠就會看得到
11/09 14:21, 2F
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11/09 14:22, 2年前 , 3F
需要留意的是 plasmid因為結構關係 跑的速率會不一樣
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11/09 14:23, 2年前 , 4F
因此如果跟標準品對照相對位置 會有一些大小的落差
11/09 14:23, 4F
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11/09 14:24, 2年前 , 5F
不過實驗上需要留意 你的plasmid有多大size 電泳要跑
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11/09 14:25, 2年前 , 6F
多久 跑太短 位置會不會太上面 不容易看 跑太長會不會
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11/09 14:26, 2年前 , 7F
跑到跳海 需要做一些預估
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11/09 14:27, 2年前 , 8F
不過這相對也跟膠的濃度有關 去google找一下原理
11/09 14:27, 8F
推
11/09 16:09, 2年前 , 9F
plasmid用kit抽出來的濃度很高，
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所以不用像DNA片段要再透過PCR放大才看得到
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11/09 16:09, 2年前 , 11F
通常plasmid跑膠應該會用限制酶切一兩刀
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11/09 16:09, 2年前 , 12F
去看片段大小有沒有符合預期吧
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11/09 16:15, 2年前 , 13F
學長姐恐怖是什麼意思？再恐怖還是要盧一盧啊，這關乎你的
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11/09 16:15, 2年前 , 14F
權益和……畢業。
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推
11/09 16:18, 2年前 , 15F
另外，你老闆說的順便跑 gDNA應該是其他或後續實驗要用到的
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11/09 16:18, 2年前 , 16F
，要先弄清楚是不是沒測過濃度或放太久了。
11/09 16:18, 16F
推
11/10 23:11, 2年前 , 17F
有辦法先測濃度嗎? 通常是用限制酶切成線性再跑膠吧
11/10 23:11, 17F
推
11/11 23:56, 2年前 , 18F
通常是用限制酶切完跑膠看band大小有沒有符合 但首先
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11/11 23:56, 2年前 , 19F
你要有質體的map 這樣才知道要用哪個限制酶切 通常找
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11/11 23:56, 2年前 , 20F
只有1-3個切位的酵素來切
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11/11 23:58, 2年前 , 21F
addgene的blog很多資訊可以看 或找current protocol看
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11/11 23:58, 2年前 , 22F
一開始我也是看那些自己學著做
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推
11/14 02:45, 2年前 , 23F
就像樓上說的，沒有用限制酶確認過都不可信
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11/25 15:21, 2年前 , 24F
謝謝樓上各位大大的指教，小妹受教了，的確是需要利用
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11/25 15:21, 2年前 , 25F
限制酶切過才會好辨認（我的理解是這樣），所以之前很
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11/25 15:21, 2年前 , 26F
糾結為什麼跑不出來（只跑plasmid), 謝謝大家！
11/25 15:21, 26F
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