[求救] 米酒中微生物RNA抽取多醣污染

看板Biotech作者 (zzzz)時間3年前 (2020/12/22 16:52), 3年前編輯推噓3(308)
留言11則, 4人參與, 3年前最新討論串1/1
大家好,我要抽的材料是發酵中米酒裡面微生物(大部分是酵母)的RNA,我在取樣後先將 樣品離心500g 40秒,取上清液將較大顆的米粒去除後再離5000g 5分鐘把菌離下來,去除 上清液(還是有一些糊化的米混合在下面的菌裡面)之後再開始用trizol來抽取RNA,在最 後用isopropanol沉澱RNA的時候會有出現多醣體的污染。目前已經試過(0.8M檸檬酸鈉+1. 2M氯化鈉)搭配isopropanol一起沉澱了,雖然有減少沉澱出來的多醣體,但是還是無法完 全去除,嚴重影響到抽出來的RNA濃度,想請問是否有什麼地方可以改進或是其他方法呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.217.239.99 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1608627175.A.2EB.html ※ 編輯: zzzz1234 (180.217.239.99 臺灣), 12/22/2020 17:36:26 ※ 編輯: zzzz1234 (180.217.239.99 臺灣), 12/22/2020 17:47:39 ※ 編輯: zzzz1234 (180.217.239.99 臺灣), 12/22/2020 17:54:17 ※ 編輯: zzzz1234 (180.217.239.99 臺灣), 12/22/2020 17:55:40

12/24 17:59, 3年前 , 1F
TCEP 植物常用
12/24 17:59, 1F

12/24 18:00, 3年前 , 2F
CTAB才對抱歉
12/24 18:00, 2F

12/25 00:34, 3年前 , 3F
有糖的東西TRIzol容易抽不動..建議CTAB或PureLink Plant
12/25 00:34, 3F

12/25 12:37, 3年前 , 4F
不好意思想請問一下CTAB是常用來抽植物RNA用的那我拿來
12/25 12:37, 4F

12/25 12:37, 3年前 , 5F
抽這個樣品中的酵母菌RNA會有影響嗎?
12/25 12:37, 5F

12/25 12:49, 3年前 , 6F
另外還想詢問一下SDS的話是否可以使用?
12/25 12:49, 6F

12/27 10:23, 3年前 , 7F
你可以參考下面yeast RNA extraction method 此外SDS
12/27 10:23, 7F

12/27 10:23, 3年前 , 8F
是可以使用的
12/27 10:23, 8F

12/27 10:23, 3年前 , 9F

12/27 10:23, 3年前 , 10F
na-isolation
12/27 10:23, 10F

12/28 11:39, 3年前 , 11F
感謝!!我會試試看protocol
12/28 11:39, 11F
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