[求救]如何確定protein和NADPH有結合

看板Biotech作者 (啃琳)時間3年前 (2020/09/25 12:44), 編輯推噓2(202)
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最近純化了一個enzyme,他的cofactor是NADPH,substrate候選人也準備好了, 想測這些substrates能不能被這個enzyme作用。 因為這是一個新的enzyme,substrate是預測的,還沒有positive control,所 以不知道怎麼確定enzyme是不是有活性。 目前的想法是,希望在和substrate作用前,先透過protein和NADPH的結合來確 定有沒有活性。 1.不知道這是不是個可行的方法? 2.如何以簡易方式偵測兩者有binding?查了有些方法都是以偵測NADP+/NADPH為主,但我 是希望NADPH不要有氧化還原反應。 想請問各位專家們有沒有經驗,或是解決方法~~謝謝~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.192 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1601009077.A.394.html

09/25 17:06, 3年前 , 1F
看substrate or product吸光值 反應完測一下?
09/25 17:06, 1F

09/25 17:06, 3年前 , 2F
會不會binding 用LC-MS
09/25 17:06, 2F

09/25 17:27, 3年前 , 3F
用isotope label H3?
09/25 17:27, 3F

09/26 10:35, 3年前 , 4F
謝謝!~~
09/26 10:35, 4F
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