[討論] 接好的質體多了未知片段

看板Biotech作者 (SDS)時間4年前 (2019/11/09 19:05), 編輯推噓4(4推 0噓 4→)
留言8則, 5人參與, 4年前最新討論串1/1
各位版友好 之前做cloning時將約1500bp的片段以Nde1及Xho1接到pET30a上， 之後transform到BL21(DE3)做蛋白表現， 蛋白有確實被表現，從BL21抽的質體用Nde1及Xho1酵切後也確實只有vector及insert的片段， 當時就用BL21做stock保存， 過了一年，當我再次從BL21上抽質體用Nde1及Xho1酵切後，卻多了一條1000bp及750bp的片段，但是蛋白卻還是能正常表現，實驗都有分次做三重複。 不曉得各位有沒有類似的經驗? ----- Sent from JPTT on my Samsung SM-G955F. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 110.26.234.190 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1573297559.A.0A5.html
推
11/09 20:32, 4年前 , 1F
送定序看有沒污染囉
11/09 20:32, 1F
→
11/09 23:44, 4年前 , 2F
我習慣不使用接進去的切位做check
11/09 23:44, 2F
推
11/10 17:35, 4年前 , 3F
分別用 insert & vector 上的切位切切看。或是直接 PCR 再
11/10 17:35, 3F
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11/10 17:35, 4年前 , 4F
測。
11/10 17:35, 4F
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11/10 17:36, 4年前 , 5F
多出來的東西從是讓人不放心。即便實驗結果可能符合預期。
11/10 17:36, 5F
推
11/12 07:32, 4年前 , 6F
你確定之前做的都是對的嗎...? 我會把整個plasmid都定
11/12 07:32, 6F
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11/12 07:32, 4年前 , 7F
完一圈
11/12 07:32, 7F
推
11/15 09:18, 4年前 , 8F
同樓上建議把整個質體送定序
11/15 09:18, 8F
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