[求救] LY294002無法抑制pAKT

看板Biotech作者 (^_^)時間4年前 (2019/08/14 23:18), 編輯推噓5(5推 0噓 7→)
留言12則, 7人參與, 4年前最新討論串1/1
各位好 最近將細胞處理LY294002這支PI3K inhibitor 想要探討PI3K-AKT pathway，但跑了好多 次發現pAKT都沒有被抑制（反而還隨濃度升高而上升） LY294002 stock: 40mM (powder in DMSO) Final concentration: 20uM , 40uM Treatment time: 6h 將細胞seeding後隔天約八成滿，處理上述濃度六小時後以冰PBS收細胞，跑Western blot 看pAKT及其下游蛋白表現量，但pAKT都沒有被抑制下來 有想過是不是時間點的問題，所以有收0.5,1,2,3,6,12h時間點，但pAKT只有在0.5h有些 微抑制，其餘皆比control (最高濃度的DMSO only)來得高... 真的trouble shooting 很多次但依然沒解決，請求各位大大救救我嗚嗚嗚 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.140.249.241 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1565795919.A.CB2.html
推
08/14 23:26, 4年前 , 1F
先Induce再inhibit?
08/14 23:26, 1F
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08/14 23:38, 4年前 , 2F
拿成akt抗體…？
08/14 23:38, 2F
推
08/14 23:40, 4年前 , 3F
做過啥troubleshooting
08/14 23:40, 3F
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08/15 03:47, 4年前 , 4F
有文獻跟你發現的一樣，可以去看他們怎麼解釋。
08/15 03:47, 4F
推
08/15 10:52, 4年前 , 5F
看到的 LY 作用時間都在1h以下欸？ 試試看縮短時間?
08/15 10:52, 5F
推
08/17 00:51, 4年前 , 6F
最近同事在做相同藥物，也是有同樣現象，但是往更下游看則
08/17 00:51, 6F
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08/17 00:51, 4年前 , 7F
是看到確實有抑制整條路徑的效果。
08/17 00:51, 7F
推
08/17 00:55, 4年前 , 8F
而且記得查Ref 也是有類似現象沒錯
08/17 00:55, 8F
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08/19 19:54, 4年前 , 9F
你的pAKT表現的時間點是什麼時候呢？根據我的經驗時間都蠻
08/19 19:54, 9F
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08/19 19:54, 4年前 , 10F
短的，大約在30分鐘以內
08/19 19:54, 10F
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08/19 20:03, 4年前 , 11F
所以，同一樓，應該是在你處理後細胞pAKT表現量最高的時間
08/19 20:03, 11F
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08/19 20:03, 4年前 , 12F
點去加LY抑制，而不用做這麼多個時間點
08/19 20:03, 12F
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