最近進行蛋白純化遇到一些問題
先前買機台的時候有教育訓練過，但年代久遠也不太常使用，實驗室其他人無相關使用經
驗，迫切求助版上高手～～～
機型：AKTA avant
Column : HIC
1_sample application
手動injection後會設定高鹽A相去洗loop
這時會有一些雜訊(導電度下降、高UV吸收)，原以為是solvent peak，但不含solvent的
樣品也有此現象，會是空氣跑進column嗎？還是純粹樣品沒binding上去?(但不懂導電度
為何會下降？)，而且收下來測濃度量也不多，有用鹼洗機台和column，但此情形沒改善Q
Q
2_Elution流速會影響純化效果嗎?
目前使用流速0.6mL/min實在流太久了，想問流速增加到1-1.2mL/min是否會使binding在c
olumn上的樣品，更容易被洗下來，影響純化效果？
3_回收率
使用手動針筒loading，針筒前端會殘留，injection valve也會有一段殘留
Column用低鹽B相和水洗，UV值都在baseline上，所以應該沒卡在column上
最懷疑的就是injection後A相洗loop的不明雜訊，可是收下來測UV量也沒那麼多
想問還有哪些部分會影響回收率？
4_剛才發生的新問題QQ
樣品injection後，高鹽洗loop時雜訊跑出來，結果UV降不下去還一直飆高(導電度維持正
常值)，以為樣品沒binding上收樣測濃度也很低，目前是先用高鹽把UV洗到baseline，再
繼續跑gradient做Elution，結果如何明天才知道，就是不知道為何UV會突然飆高啊啊啊(
崩潰)
麻煩大家了～～～謝謝～～QQ
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